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人軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(hCOMP)ELISA試劑盒

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產(chǎn)品型號48T/96T

品       牌

廠商性質(zhì)代理商

所  在  地上海市

更新時間:2019-01-09 16:46:13瀏覽次數(shù):644次

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人軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(hCOMP)ELISA試劑盒
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人軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(hCOMP)ELISA試劑盒

 

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    ELISA 試驗時,注意事項如下:

     1. 正式試驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實驗結(jié)果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

    2. 在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:

    (1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

   2) 包被抗體或抗原的選擇:將抗體或抗原吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH9.09.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用41824小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.11.010μgml進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為110μgml

    (3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定見酶標記抗體部份。然后再固定其它條件或采取“方陣法”包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。

    (4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體OPD有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMBABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入

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