張經理
當前位置:西安百螢生物科技有限公司>>trFluor™ 染料和試劑盒>>檢測試劑盒>> 13803Amplite 比色法丙an酸轉氨酶檢測試劑盒
Amplite 比色法丙an酸轉氨酶檢測試劑盒 是美國AAT Bioquest生產的用于檢測轉氨酶的試劑盒,丙*酸氨基轉移酶(ALT),也稱為血清谷*酸丙酮酸轉氨酶(GPT),是轉移酶家族的成員。 它催化丙*酸和谷*酸之間α-氨基的可逆轉移,是氨基酸代謝中的重要酶。 ALT主要存在于肝臟中,少量存在于心臟,肌肉和腎臟中。 在健康受試者中,血清ALT水平低。 然而,當細胞受損時,例如急性和慢性肝炎,阻塞性黃疸,肝癌,心肌梗塞,ALT可能會滲入血流并且ALT水平顯著升高。 因此,測定血清ALT水平具有重要的臨床和診斷意義。
Amplite 比色法丙*酸氨基轉移酶檢測試劑盒為各種生物樣品中的ALT測量提供了一種快速而靈敏的方法。 ALT催化丙*酸和α-酮戊二酸與丙酮酸和谷*酸的反應:
丙*酸(Ala)+α-酮戊二酸=丙酮酸+谷*酸(Glu)
通過酶偶聯反應循環產生藍色產物來測量產物谷*酸。 可以通過吸光度酶標儀在~575nm處讀取信號,或者通過A570nm至A610nm的吸光度比率來讀取信號以提高測定靈敏度。 使用Amplite 比色法丙*酸氨基轉移酶檢測試劑盒,在100μL反應體積中檢測到少至10 mU / mL的ALT。 該測定是穩健的,并且可以容易地適用于各種各樣的應用。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供優質的Amplite 比色法丙an酸轉氨酶檢測試劑盒 。
實驗方案
96孔板測定示例
概述
準備ALT反應混合物(50μL)
加入ALT標準品或測試樣品(50μL)
孵育于37°C 30分鐘至60分鐘
監測吸光度在575±5 nm處增加或在A570nm / A610nm處的吸光度比率
注意:在開始實驗之前,在室溫下解凍一個組分A和B
操作方法
1.準備ALT標準品的連續稀釋液(1至1000 mU / mL):
1.1將100μLDPBS加入ALT陽性對照(組分D)小瓶中,制成100U / mL ALT儲備液。
注意:未使用的ALT原液應分成單次使用的等分試樣并儲存在20℃。
1.2將10μL的100 U / mL ALT標準溶液(來自步驟1.1)加入含有0.1%BSA的990L DPBS緩沖液中,以產生1U / mL ALT標準溶液。
1.3取300μL1U/ mL ALT標準溶液進行1:3連續稀釋,得到300,100,30,10,3,1和0 mU / mL ALT標準品系列稀釋液。
1.4如說明書中的表1和2中所述,將ALT標準品和含有ALT的測試樣品的系列稀釋液加入白色/透明底96孔微孔板中。
注意:如果需要,將測試樣品稀釋至含有0.1%BSA的DPBS緩沖液中的濃度范圍。
2.準備ALT測定混合物:
2.1將100μLDdH2O加入到NAD小瓶(組分C)中,得到100X NAD溶液。
2.2將10 mL ALT分析緩沖液(組分B)加入ALT酶混合物瓶中(組分A),并充分混合。
2.3將整瓶100X NAD溶液(來自步驟2.1)加入ALT酶混合物溶液(來自步驟2.2)以得到ALT測定混合物。
注意1:該ALT測定混合物足以用于兩個96孔板。在室溫下不穩定,應在2小時內及時使用,避免暴露在光線下。
注意2:或者,可以通過向組分A的瓶中加入200μLH2O制備50X的ALT酶混合物原液,然后通過將原液與測定緩沖液(組分B)和100x NAD混合制備ALT測定混合物。 按比例解決。 將未使用的50X ALT酶混合物原液和100X NAD溶液分裝并儲存在-20℃,避免凍融循環。
3.運行ALT測定:
3.1將50μLALT測定混合物(來自步驟2.3)添加至ALT標準品,空白對照和測試樣品(參見步驟1.4)的每個孔中,以使總ALT測定體積為100μL/孔。
注意:對于384孔板,每孔加入25μL樣品和25μLALT測定混合物。
3.2在37°C下孵育反應30分鐘至60分鐘,避光。
注意:空白控制的背景隨著時間的推移而增加。
3.3使用吸光度讀數器在575±5 nm或吸光度比率A570nm / A610nm監測吸光度增加,以提高檢測靈敏度。
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