Amplite 比色法丙an酸轉(zhuǎn)氨酶檢測試劑盒 是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測轉(zhuǎn)氨酶的試劑盒，丙*酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT），也稱為血清谷*酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶（GPT），是轉(zhuǎn)移酶家族的成員。 它催化丙*酸和谷*酸之間α-氨基的可逆轉(zhuǎn)移，是氨基酸代謝中的重要酶。 ALT主要存在于肝臟中，少量存在于心臟，肌肉和腎臟中。 在健康受試者中，血清ALT水平低。 然而，當細胞受損時，例如急性和慢性肝炎，阻塞性黃疸，肝癌，心肌梗塞，ALT可能會滲入血流并且ALT水平顯著升高。 因此，測定血清ALT水平具有重要的臨床和診斷意義。

Amplite 比色法丙*酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒為各種生物樣品中的ALT測量提供了一種快速而靈敏的方法。 ALT催化丙*酸和α-酮戊二酸與丙酮酸和谷*酸的反應(yīng)：

丙*酸（Ala）+α-酮戊二酸＝丙酮酸+谷*酸（Glu）

通過酶偶聯(lián)反應(yīng)循環(huán)產(chǎn)生藍色產(chǎn)物來測量產(chǎn)物谷*酸。 可以通過吸光度酶標儀在~575nm處讀取信號，或者通過A570nm至A610nm的吸光度比率來讀取信號以提高測定靈敏度。 使用Amplite 比色法丙*酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒，在100μL反應(yīng)體積中檢測到少至10 mU / mL的ALT。 該測定是穩(wěn)健的，并且可以容易地適用于各種各樣的應(yīng)用。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 比色法丙an酸轉(zhuǎn)氨酶檢測試劑盒 。

實驗方案

96孔板測定示例

概述

準備ALT反應(yīng)混合物（50μL）

加入ALT標準品或測試樣品（50μL）

孵育于37°C 30分鐘至60分鐘

監(jiān)測吸光度在575±5 nm處增加或在A570nm / A610nm處的吸光度比率

注意：在開始實驗之前，在室溫下解凍一個組分A和B

操作方法

1.準備ALT標準品的連續(xù)稀釋液（1至1000 mU / mL）：

1.1將100μLDPBS加入ALT陽性對照（組分D）小瓶中，制成100U / mL ALT儲備液。

注意：未使用的ALT原液應(yīng)分成單次使用的等分試樣并儲存在20℃。

1.2將10μL的100 U / mL ALT標準溶液（來自步驟1.1）加入含有0.1％BSA的990L DPBS緩沖液中，以產(chǎn)生1U / mL ALT標準溶液。

1.3取300μL1U/ mL ALT標準溶液進行1：3連續(xù)稀釋，得到300,100,30,10,3,1和0 mU / mL ALT標準品系列稀釋液。

1.4如說明書中的表1和2中所述，將ALT標準品和含有ALT的測試樣品的系列稀釋液加入白色/透明底96孔微孔板中。

注意：如果需要，將測試樣品稀釋至含有0.1％BSA的DPBS緩沖液中的濃度范圍。

2.準備ALT測定混合物：

2.1將100μLDdH2O加入到NAD小瓶（組分C）中，得到100X NAD溶液。

2.2將10 mL ALT分析緩沖液（組分B）加入ALT酶混合物瓶中（組分A），并充分混合。

2.3將整瓶100X NAD溶液（來自步驟2.1）加入ALT酶混合物溶液（來自步驟2.2）以得到ALT測定混合物。

注意1：該ALT測定混合物足以用于兩個96孔板。在室溫下不穩(wěn)定，應(yīng)在2小時內(nèi)及時使用，避免暴露在光線下。

注意2：或者，可以通過向組分A的瓶中加入200μLH2O制備50X的ALT酶混合物原液，然后通過將原液與測定緩沖液（組分B）和100x NAD混合制備ALT測定混合物。 按比例解決。 將未使用的50X ALT酶混合物原液和100X NAD溶液分裝并儲存在-20℃，避免凍融循環(huán)。

3.運行ALT測定：

3.1將50μLALT測定混合物（來自步驟2.3）添加至ALT標準品，空白對照和測試樣品（參見步驟1.4）的每個孔中，以使總ALT測定體積為100μL/孔。

注意：對于384孔板，每孔加入25μL樣品和25μLALT測定混合物。

3.2在37°C下孵育反應(yīng)30分鐘至60分鐘，避光。

注意：空白控制的背景隨著時間的推移而增加。

3.3使用吸光度讀數(shù)器在575±5 nm或吸光度比率A570nm / A610nm監(jiān)測吸光度增加，以提高檢測靈敏度。