天根DNA純化試劑盒-DP205產品簡介

  天根DNA純化試劑盒-DP205試劑盒采用的離心吸附柱純化酶切、PCR等反應溶液中的DNA片段，同時除去蛋 白質、其它有機化合物、無機鹽離子及寡核苷酸引物等雜質，回收100 bp-10 kb DNA片段， 回收率可達80%以上。每個離心吸附柱每次可吸附的DNA量為20 μg。 使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規操作，包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、 連接和轉化等實驗。

 產品特點 快速：整個操作過程只需十幾分鐘，節省時間。

 多樣：可以回收單鏈、雙鏈DNA片段以及環狀質粒DNA。

 高效：離心柱和緩沖液可大量回收到高純度目的DNA。

1．本試劑盒適用于無選擇性的回收溶液中所有DNA片段（可去除50 bp以下的小片段），如 需選擇性回收特定片段，同時去除其他不同大小片段，請選擇膠回收試劑盒。

2．洗脫緩沖液加量應根據回收前DNA量來決定：如回收前DNA只有1-5 μg左右，則應選用 超薄型離心柱，加20-50 μl洗脫緩沖液；回收前為5-20 μg左右的DNA，應選用普通型離 心柱，加30-100 μl洗脫緩沖液；如回收前有20-30 μg左右DNA，則應選用大量型離心 柱，加50-300 μl洗脫緩沖液。

3．回收率與初始DNA量和洗脫體積有關，初始量越少、洗脫體積越少，回收率越低。

4．對于10 kb的DNA片段可以適當的增加吸附和洗脫的時間

5．平衡液BL的加入能夠改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和穩定性，消除高溫 /潮濕或其他不良環境因素對吸附柱造成的影響。使用前請先檢查平衡液BL是否出現渾 濁，如有混濁現象，可在37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復澄清。

6．用平衡液處理過的柱子應當天使用，放置時間過長會影響效果。 

注意事項 請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項

天根DNA純化試劑盒-DP205操作步驟

 使用前請在漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1. 柱平衡步驟：向吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中）加入500 μl的平衡液BL，12,000 rpm (~13,400×g) 離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。（請使用 當天處理過的柱子）

2. 估計PCR反應液或酶切反應液的體積，向其中加入5倍體積的結合液PB，充分混勻（無 需去除石蠟油或礦物油）。 注意：如PCR反應體系為100 μl（不包括石蠟油體積）, 則加入500 μl結合液PB。

3. 將上一步所得溶液加入一個吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），室溫放置2 min， 12,000 rpm(~13,400×g)離心30-60 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CB3放入收集 管中。 注意：吸附柱容積為800 μl，若樣品體積大于800 μl可分批加入。

4. 向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)離心30-60 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。 注意：如果純化的DNA是用于鹽敏感的實驗，例如平末端連接實驗或直接測序，建議PW 加入后靜置2-5 min再離心。

5. 重復操作步驟4。

6. 將離心吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min，盡量除去漂洗 液。將吸附柱置于室溫放置數分鐘，地晾干，以防止殘留的漂洗液影響下一步的實 驗。 注意：漂洗液中乙醇的殘留會影響后續的酶反應（酶切、PCR等）實驗

7. 取出吸附柱CB3放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加適量洗脫緩沖液 EB，室溫放置2 min。12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min，收集DNA溶液。 注意：洗脫液的體積不應少于50 μl，體積過少會影響回收的效率。洗脫液的pH值對于洗 脫效率有很大影響。若后續做測序，需使用ddH2O做洗脫液，并保證其pH值在7.0-8.5范 圍內，pH值低于7.0會降低洗脫效率；且DNA產物應保存在-20℃，以防DNA降解。DNA 也可以用緩沖液(10 mM Tris-Cl, pH8.0) 洗脫。為了提高DNA的回收量，可將離心得到的 溶液重新加回離心吸附柱中，再次離心。

DNA濃度及純度檢測 回收得到的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。 DNA應在OD260處有顯著吸收峰，OD260值為1相當于大約50 μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml 單鏈DNA。 OD260/OD280比值應為1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用ddH2O，比值會偏 低，因為pH值和離子存在會影響光吸收值，但并不表示純度低。