細胞轉染-QuickShuttle-Enhanced-轉染試劑增強型

貨號：KX0110042 

含量：0.8 ml 

用途：

（1）用于大多數哺乳動物貼壁細胞系的瞬時轉染和穩定細胞系構建； 

（2）用于難轉哺乳動物細胞系的瞬時轉染和穩定細胞系構建。

 注意事項：

 1. 質粒 DNA：請用能夠去除內毒素的方法制備高質量的質粒 DNA。

 2. 稀釋液：0.85%（W/V）生理鹽水，用低內毒素純水配制，高壓消毒或除菌過濾。

 3. 培養基：經過 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常規培養基測試，推薦使用含 5~10%牛血清的 DMEM，若轉染效果不理想可嘗試其它培養基。

 4. 以 24 孔細胞板轉染實驗為例，推薦每孔低內毒素質粒 DNA 用量為 1~2µg、轉染試劑用量為 3~5µl， 請在正式實驗前根據不同細胞和不同培養基用報告基因進行優化。

 5. 如果實驗目的在于篩選抗藥性穩定細胞系，可在細胞傳代后尚未貼壁時直接進行轉染，從而可節省 18~24 小時的轉染前細胞培養時間。 使用方法：

 1. 轉染前 18~24 小時接種細胞到 24 孔細胞板中，每孔 5~10×104細胞，1ml 培養基。

備注：如果篩 選抗藥性穩定細胞系，可以考慮簡化的實驗步驟，即在細胞傳代后直接按下述步驟 2~5 進行轉染，無 需 18~24 小時的等候時間。

 2. 將 1~2μg 質粒 DNA 和 3~5μl 轉染試劑分別稀釋到 50μl 生理鹽水中。

備注：質粒 DNA 和轉染試劑的 量需要根據不同細胞和不同培養基來優化，但理論上不超出 1~2µg 和 3~5µl 范圍。 

3. 合并上述兩溶液并混勻。備注：無需其它轉染試劑所需的 10~30 分鐘的等候時間。 

4. 將上述復合物直接加入到細胞培養基中，輕搖細胞板或用加樣器吸打混勻。

備注：轉染復合物可直接 加入含血清的細胞培養基中進行轉染。在極少情況下會出現貼壁細胞脫落現象，可先從待轉染細胞孔中吸取 500µl 培養基與轉染復合物預混后再加入細胞中。若在細胞瓶中進行轉染，直接加入到無細胞 貼壁的對面或側面并搖勻即可。

 5. 將細胞板移至 37oC/5% CO2 孵箱中進行培養。備注：無需在轉染后 4~6 小時補加血清或更換培養 基。

 6. 24~72 小時后根據實驗需要進行瞬時表達分析或穩定細胞系加壓篩選。