sybr green熒光染料-熒光定量PCR

一、SYBR Green 熒光染料熒光定量PCR 原理

SYBR Green 熒光染料 I 與 dsDNA 結(jié)合熒光信號可增強 800—1000 倍。在 PCR 反應(yīng)體系中，加入 適量 SYBR Green I 熒光染料，SYBR 熒光染料特異性地?fù)饺?DNA 雙鏈后，熒光信號增強，而不 摻入鏈中的 SYBR Green I 染料分子熒光不變，從而保證熒光信號的增加與 PCR 產(chǎn)物的增加同步。熒光可以在退火階段或者延伸階段測定。

 二、使用方法： 

我們提供的為 20×的濃縮液，使用時可稀釋 20—100 倍，使反應(yīng)的終濃度為 1×到 0.2× 之間。例如配 50ul 總體積的 PCR 反應(yīng)液，應(yīng)加 20×的 SYBR Green I 染料 0.5ul—2.5ul。

 三、使用濃度對熒光 PCR 結(jié)果的影響

 SYBR Green 熒光染料 熒光定量 PCR 的試驗成功有很多因素，但是 SYBR Green I 的使用濃度是非 常關(guān)鍵的因素 ，如果 SYBR Green I 的濃度過低會使熒光信號的變化降低。這就意味著低拷貝 的樣品可能無法檢出；而在高濃度時，將會抑制 PCR 反應(yīng)。降低 PCR 反應(yīng)效率。所以一般在使 用 SYBR Green I 時應(yīng)根據(jù)實際情況優(yōu)化使用濃度。

 四、鎂離子濃度的影響 

     提高鎂離子濃度可以降低 SYBR Green I對 PCR 反應(yīng)的抑制作用。我們建議在用 SYBR Green I 進行熒光 PCR 反應(yīng)時，鎂離子濃度要比無 SYBR Green I 的普通 PCR 反應(yīng)要高出 0.5 至 3mM。

 五、SYBR Green 熒光染料 僅供科研使用。 

六、保存方法

避光，4 度運輸，-20 度保存有效期 2 年。