HyCyte成人骨髓間充質干細胞

Human Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells（H BMSCs）

HyCyte成人骨髓間充質干細胞 取自18-45歲成人骨髓，傳代擴增至第二代凍存。本產品經生物安全檢測，無細菌、真菌、霉菌、支原體和病毒污染，表達多種人源間質干細胞特異性標記，具有良好的增殖和分化潛能，可分化為成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞等。

細胞名稱：HyCyte™成人骨髓間充質干細胞

細胞簡稱：H MSC

產品貨號：BMHX-C106

種屬來源：人

規格：1× 10^6 cells/Vial

組織來源：骨髓

細胞形態：成纖維細胞樣

生長特性：貼壁生長

培養基貨號：BMHX-G101

傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

傳代周期：48-72 h

培養條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

凍存條件：60%基礎培養基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲存

質量檢測：細菌、真菌、支原體檢測均為陰性

毒素檢測：＜10 EU/mL

參考文獻：

Bartsch T,Falke T , Brehm M. Intra-arterial and intrarnuscular transplanta-tion of adult , autologous bone marrow stem cells. Novel treatment for thera-py refractory peripheral arterial occlusive disease[ J]. Dtsch Med Wochen-schr ,2006 ; 131(3):79-83.

Sohara Y , Shimada H , Minkin C,et al.Bone marrow mesenchymal stemcells provide an alternate pathway of osteoclast activation and bone de-struction by cancer cells[ J]. Cancer Res , 2005 ;65(4):1129-35.

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| 收貨后處理方法

收到細胞后請檢查包裝是否完整，干冰是否充足，凍存管有無破損，并核對管身標簽信息和數量，

確認是否與裝箱單一致。如有異常情況，請及時與我們聯系。

如不立即進行實驗，請將細胞放至-80℃或液氮中保存。

| 產品描述

蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司提供的HyCyte™成人骨髓間充質干細胞取自成人骨髓，經檢測，確保細胞無細菌、真菌、支原體和病毒污染，表達多種間充質干細胞特異性表面標記，具有良好的增殖和分化潛能，經定向誘導，可分化為脂肪細胞、成骨細胞、成軟骨細胞等。

凍存代次： P2

培養體系： HyCyteTM成人骨髓間充質干細胞專用培養基（Cat. BMHX-G101）

換液時機： 發現有比較多的死細胞或培養基顏色較黃時，應換液。一般為每 2-3 天換液

傳代比例： 一般為 1:2

傳代周期： 細胞匯合度達 80%~90%時，可進行傳代，一般為 48~72 h，不可讓間充質干細

胞融合或過度融合，以免發生生長接觸抑制，影響細胞的生長狀態。

培養條件： 氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

凍存條件： 海星一步凍存液 HyCyteTM One Step Freezing Medium（Cat. GUCP-R201）

NOTE：該產品僅供科研使用，不可用于其他方面。

使用說明書：

| HyCyteTM H BMSCs 的復蘇

1) 實驗前開啟水浴鍋預熱培養基。

2) 在工作臺中準備好 15 mL 離心管加入 5 mL預熱后的培養基。

3) 從-80°C 冰箱中取出凍存管，將凍存管置于37℃水浴鍋內，快速搖動解凍直到內容物融化，同時需注意避免水面沒過管口。

NOTE：建議將液氮中的細胞提前取出置于-80°C 待

液氮揮發后復蘇。

4) 對凍存管外壁進行常規消毒后，在工作臺內小心開蓋，盡量避免氣泡溢出，輕柔吹打數次，轉移至 15 mL 離心管內。使用 1 mL 培養基

清洗凍存管內壁，一并收集至 15 mL 離心管內。

5) 250 g 離心 5 min，收集細胞沉淀，棄掉上清并加入 2 mL 培養基重懸（如有臺盼藍可取少量進行染色計數）。

6) 將重懸后的細胞接種至 T25 或同等底面積器皿，“劃十字"搖晃細胞培養器皿，使細胞均勻分布。把細胞放入 37°C，5%CO2，飽和濕度的培養箱中培養。

7) 24h 后鏡下拍照觀察，換液后繼續培養。如有異常情況，請及時與我們聯系。

| HyCyteTM H BMSCs 的傳代

1) 預熱 1×PBS、和培養基。

2) 吸去原培養基。用 1×PBS 洗滌細胞 2~3 次。

3) 吸去 1×PBS。加入。輕輕旋轉，使 覆蓋細胞表面，消化，顯微鏡下觀察約 70%~80%左右的細胞變圓后，用手輕拍培養 器皿外壁使細胞脫壁。

4) 當觀察到細胞明顯脫落，立即加入預熱的完 全培養基終止消化。用吸管吸取液體，反復輕 柔吹打培養器皿底壁，使細胞脫離器皿底壁。

NOTE：建議可添加 2 倍用量的培養基用于 終止消化。

5) 將細胞懸液轉移到離心管中。用 1xPBS 清洗 底壁，收集細胞懸液至離心管中。

6) 250 g 離心 5 min。

7) 小心棄去上清液，加入 1~2mL 培養基重 懸細胞。

8) 選擇合適的培養器皿，加入適量培養基， 按照合適的傳代比例（一般為 1:2）接種細胞,“劃十字"搖晃細胞培養器皿，使細胞均勻分布。

9) 把細胞放入 37°C，5%CO2，飽和濕度的培養 箱中培養。

HyCyteTM H BMSCs 的凍存

1) 待細胞生長至可傳代的匯合度，即可消化準備 凍存。

2) 消化細胞，取少量細胞懸液計數。細胞懸液經 250 g離心5 min。

3) 小心棄掉上清。用4°C預冷的凍存液重懸細胞， 一般凍存密度為1×10^6個/mL。

4) 對凍存管進行標識后，把細胞分裝到凍存管中， 旋緊凍存管蓋。

5) 如使用HyCyteTM海星一步凍存液，凍存管直接 豎直放入-80°C冰箱即可。 如使用程序凍存液，需將凍存管放入程序降溫 盒后方可放入-80°C冰箱。

6) 24小時后可將細胞轉移到液氮進行長期保存。