對于大鼠Ⅱ型膠原（ColⅡ）定量檢測試劑盒技術分析

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    本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）。將標準品、待測樣本加入到預先包被大鼠Ⅱ型膠原（ColⅡ ）單克隆抗體透明酶標包被板中，溫育足夠時間后，洗滌除去未結合的成分，再加入酶標工作液，溫育足夠時間后，洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉化為藍色產物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中大鼠Ⅱ型膠原（ColⅡ）濃度呈正相關，450nm波長下測定OD值，根據標準品和樣品的OD值，計算樣本中大鼠Ⅱ型膠原（ColⅡ）含量。

【注意事項】

1、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

2、酶標包被板開封后如未用完，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。

4、牢記樣本已經稀釋5倍，計算結果乘以5才是樣本實際濃度。

5、若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間。

6、為避免交叉污染，標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復使用封板膜。

7、試劑盒保質期內使用，不同批號的試劑不得混用。

8、底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

【操作程序總結】

準備試劑，樣品和標準品

加入準備好的樣品和標準品，37℃反應30分鐘

洗板4次，加入酶標試劑，37℃反應30分鐘

洗板4次，加入顯色液A、B，37℃顯色15分鐘

加入終止液

15分鐘之內讀OD值

計算

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