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上海繼錦化學科技有限公司
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植物綠色熒光蛋白(GFP)ELISA試劑盒說明書

時間:2013/2/25閱讀:689
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本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫學診斷

檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被綠色熒光蛋白(GFP)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的綠色熒光蛋白(GFP)呈正相關。用酶標儀you
在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。
2. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行。
3. 植物萃取液或其它相關樣本:請1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測。
4. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1.     酶標儀(450nm)
2.     高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.     37恒溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現象,水浴加熱使結晶*溶解后再使用。
2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
3. 濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍,zui終結果乘以5才是樣本實際濃度。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成

名稱
96孔配置
48孔配置
備注
微孔酶標板
12孔×8條
12孔×4條
標準品
0.3mL*6管
0.3mL*6管
樣本稀釋液
6mL
3mL
檢測抗體-HRP
10mL
5mL
20×洗滌緩沖液
25mL
15mL
按說明書進行稀釋
底物A
6mL
3mL
底物B
6mL
3mL
終止液
6mL
3mL
封板膜
2張
2張
說明書
1份
1份
自封袋
1個
1個

注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、5、10、20、40、80 ng/mL
試劑的準備
 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
2. 自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3. 樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
結果判斷
 繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1.  準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,大于等于0.9900。
2.  靈敏度:zui低檢測濃度小于1.0 ng/mL。
3.  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4.  重復性:板內、板間變異系數均小于15%。
5.  貯藏:2-8,避光防潮保存。
6.  有效期:6個月
免責聲明
1.   試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。

 嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔

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