熒光素標記有死亡區的腫瘤壞死因子受體1相關蛋白抗體IgG

　對抗原的要求是純度越高越好，尤其是初次免疫所用的抗原。如為細胞抗原，可取1×107個細胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加*福氏佐劑并經充分乳化，如為聚丙烯酰胺電泳純化的抗原，可將抗原所在的電泳條帶切下，研磨后直接用以動物免疫。

　　選擇與所用骨髓瘤細胞同源的BALB/c健康小鼠，鼠齡在8～12周，雌雄不限。為避免小鼠反應而不佳或免疫過程中死亡，可同時免疫3～4只小鼠。

　　免疫過程和方法與多克隆抗血清制備基本相同，因動物、抗原形式、免疫途徑不同而異，以獲得價抗體為zui終目的。免疫間隔一般2～3周。一般被免疫動物的血清抗體效價越高，融合后細胞產生價特異抗體的可能性越大，而且單克隆抗體的質量（如抗體的濃度和親和力）也與免疫過程中小鼠血清抗體的效價和親和力密切相關。末次免疫后3～4天，分離脾細胞融合。

細胞融合是雜交瘤技術的中心環節，基本步驟是將兩種細胞混合后加入PEG使細胞彼此融合。其后吧培養液稀釋PEG，消除PEG的作用。將融合后的細胞適當稀釋，分置培養板孔中培養。融合過程中有幾個問題應特別注意。①細胞比例：骨髓瘤細胞與脾細胞的比值可從1:2到1:10不等，常用1:4的比例。應保證兩種細胞在融合前都具有較高活性。②反應時間：在兩種細胞的混合細胞懸液中，第1min滴加4.5ml培養液；間隔2min滴加5ml培養液，爾后加培養液50ml。③培養液的成分：對融合細胞，良好的培養液尤其重要，其中的小牛血清、各種離子和營養成分均需嚴格配制。如融合效率降低，應隨時核查培養基情況。