酶聯(lián)免疫測(cè)定技術(shù)（ELISA

時(shí)間：2012-5-13閱讀：4118

酶聯(lián)免疫測(cè)定技術(shù)（ELISA）的放大系統(tǒng)

點(diǎn)擊次數(shù)：90 發(fā)布時(shí)間：2011-11-29

酶免疫測(cè)定自20世紀(jì)70年代初創(chuàng)立以來(lái)，由于其具有特異、靈敏、簡(jiǎn)便、快速的特點(diǎn)，現(xiàn)已在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域及臨床疾病的診療中得到了廣泛的應(yīng)用，相對(duì)于放射免疫測(cè)定（RIA）技術(shù)來(lái)說(shuō)，EIA還有試劑半衰期長(zhǎng)，對(duì)環(huán)境污染小，試驗(yàn)廢物易于處理等優(yōu)點(diǎn)，但測(cè)定敏感性一般較RIA低，于是，為提高EIA的測(cè)定敏感性，出現(xiàn)了眾多的EIA測(cè)定放大系統(tǒng)，使EIA的測(cè)定敏感性趕上甚或超過了RIA。

建立正IA測(cè)定放大系統(tǒng)的一般原則

EIA本身是以酶[辣根過氧化物酶（HRP）、堿性磷酸酶（AP）等]作標(biāo)記物的，因此，EIA的測(cè)定放大始終是圍繞著標(biāo)記酶來(lái)作文章的，不外乎三種可能的方式：①增加標(biāo)記酶的量；②非顯色底物的應(yīng)用；③附加一個(gè)受標(biāo)記酶催化的反應(yīng)系統(tǒng)。

一、增加標(biāo)記酶的量

通過*／親合素—酶或酶／抗酶復(fù)合物的間接方法，可以增加ELISA測(cè)定中zui后所測(cè)定的標(biāo)記酶的量。這種方法雖在一定程度上由于標(biāo)記酶的聚集增加了EIA的測(cè)定敏感性，但同時(shí)有增加非特異的背景顯色的可能。

二、非顯色底物的應(yīng)用

從酶的反應(yīng)底物著手，使用具有高測(cè)定敏感性的非顯色底物如熒光素或發(fā)光物，從而提高EIA的測(cè)定敏感性，這種方法的優(yōu)點(diǎn)是不需額外的步驟及試劑制備，缺點(diǎn)是需要特殊的測(cè)定儀器。

三、附加一個(gè)受標(biāo)記酶催化的反應(yīng)系統(tǒng)

原始標(biāo)記酶催化附加一個(gè)反應(yīng)系統(tǒng)，如酶底物反應(yīng)循環(huán)或酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而達(dá)到反應(yīng)放大的目的。這種由數(shù)個(gè)催化反應(yīng)的耦聯(lián)而構(gòu)建的放大系統(tǒng)，是酶放大的根本之所在，敏感性的提高來(lái)源于真正的信號(hào)放大，而不是簡(jiǎn)單地將一個(gè)分子轉(zhuǎn)變?yōu)楦嗟囊子跍y(cè)定的分子。一個(gè)適用的酶放大系統(tǒng)的選擇除了要考慮生化因素外，zui為重要的是酶及其底物的穩(wěn)定性，并要易于獲得，因其對(duì)試驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性有較大的影響。

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