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上海金穗生物科技有限公司

在微量滴定板中表達噬菌體抗體

時間:2013-3-5閱讀:835
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[器材和試劑]
● 用于細菌培養的無菌96孔圓底微量滴定板,如Nune 62162(可自VWR購得)
● 2×TY/amp/glu培養基
● 含30%甘油的2×TY/amp/glu培養基(2×TY/amp/glu/gly)
● 2×TY/amp/kan培養基
● 選自鋪板培養或抗體文庫選擇的克隆株


[方法]
1.用無菌牙簽挑取單個克隆,分別置于每孔含100tH 2×TY/amp/glu的96孔微量滴定板 板孔中。振蕩(300r/rain)培養過夜,放在微量滴定板架上。
2.每孔加入50ul2×TY/amp/glu/gly并儲存于-70℃。
3.使用96孔無菌轉移設備或移液器,從主板每孔中吸取2ul,接種到一塊每孔含150ul 2×TY/amp/Rlu的96孔板中。37℃振蕩,直到A600值接近0.5(2.5小時)。
4.每孔加入50ul含2X109pfu/m1輔助噬菌體(在儲存料中稀釋)的2×TY/amp/glu。噬菌體與細菌的比例應當接近20:1。37℃下孵育孔板30分鐘。
5.以2700r/min離心孔板10分鐘,用多道移液器或吸取設備移除上清。
6.用150l 2×TY/amp/kan重懸每孔的細菌沉淀。 因為抗體表達取決于1acZ啟動子的滲漏表達,因此這一步要去除葡萄糖。37℃振蕩(300r/min)培養孔板過夜。
7.次日,以2700r/min離心孔板10分鐘;每孔取50F1上清用來進行噬菌體ELISA。

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