一、 蛋白質(zhì)鹽析
（一）目的要求 了解蛋白質(zhì)的沉淀作用，加深對(duì)影響蛋白質(zhì)膠體分子穩(wěn)定性因素的認(rèn)識(shí)。
（二）實(shí)驗(yàn)原理
水溶液中蛋白質(zhì)分子由于表面生成水化層及蛋白質(zhì)分子上某些基團(tuán)離子化而使蛋白質(zhì)分子表面帶有電荷，增加了水化層的厚度而成為穩(wěn)定的親水膠體顆粒，水膜和電荷一旦被除去，蛋白質(zhì)顆粒將由于失去電荷和脫水而發(fā)生沉淀。
向蛋白質(zhì)溶液中加入無機(jī)鹽（如硫酸銨、*、氯化鈉等）后，蛋白質(zhì)便從溶液中沉淀析出，這種沉淀作用稱為蛋白質(zhì)鹽析。其過程是一個(gè)可逆過程，當(dāng)除去引起蛋白質(zhì)沉淀因素后，被鹽析的蛋白質(zhì)仍可重新溶于水中，其天然性質(zhì)不發(fā)生變化。
用不同濃度的鹽可將不同種類蛋白質(zhì)從混合溶液中分別沉淀的過程，稱為蛋白質(zhì)的分級(jí)鹽析。例如蛋清溶液中的球蛋白可被半飽和的硫酸銨溶液沉淀提取，飽和的硫酸銨溶液可使清蛋白沉淀析出。因此，鹽析法常被用于分離和提取各種蛋白質(zhì)及酶制劑。
（三）試劑及材料
1、10%蛋清溶液 選新鮮雞蛋，輕輕在蛋殼上擊破一小孔，取出蛋清，按新鮮雞蛋清1份，九份0.9%NaCl 溶液的比例稀釋配制蛋清液，混勻，用四層紗布過濾后備用。
2、飽和硫酸銨溶液 稱取76.6g硫酸銨溶于100mL 25℃ 蒸餾水中。
3、固體硫酸銨。
（四）操作方法
1、取兩支試管，分別加入10%蛋清溶液5 mL，飽和硫酸銨5 mL，靜置5min，觀察有否沉淀物產(chǎn)生，沉淀物為何物？
2、取其一試管，用點(diǎn)滴管棄去上清夜，加水至沉淀物，觀察沉淀是否會(huì)再溶解，說明沉淀反應(yīng)是否可逆。
3、用濾紙把另一試管的沉淀混合物過濾，向?yàn)V液中添加固體硫酸銨至溶液飽和，注意觀察溶液有否蛋白質(zhì)沉淀產(chǎn)生，此沉淀又為何物？
注意：把溶液中硫酸銨固體沉淀與蛋白質(zhì)沉淀區(qū)別開來。
二、蛋白質(zhì)的透析
（一）目的要求 學(xué)習(xí)透析的基本原理和方法
（二）實(shí)驗(yàn)原理
透析是利用小分子能通過，而大分子不能透過半透膜的原理，把不同性質(zhì)的物質(zhì)彼此分開的一種手段。透析過程中因蛋白質(zhì)分子體積很大，不能透過半透膜，而溶液中的無機(jī)鹽小分子則能透過半透膜進(jìn)入水中，不斷更換透析用水即可將蛋白質(zhì)與小分子物質(zhì)*分開。蛋白質(zhì)和酶的提取過程，常用此法使之脫鹽。
如果透析時(shí)間過長，可采用低溫條件下進(jìn)行，以防止微生物滋長、樣品變質(zhì)或降解。
透析袋材料通常有火棉膠、商品化透析袋等。
利用*和雙縮脲反應(yīng)的透析結(jié)果進(jìn)行檢驗(yàn)：


（三）試劑及材料
1、氯化鈉蛋清溶液 取一個(gè)雞蛋清蛋白，加入30%NaCl溶液100mL、250 mL蒸餾水混合均勻后，四層紗布過濾。
2、1%AgNO3 稱取1g AgNO3 ,溶解于100 mL水中，貯存棕色瓶保存。
3、1%CuSO4 稱取1g CuSO4，用水溶解并稀釋至100mL。
4、10%NaOH 稱取10g NaOH，用水溶解并稀釋至100mL。
5、5%火棉膠 分析純。
（四）操作方法
1、透析袋的制備 直接把5%火棉膠試劑約10 mL倒入潔凈、干燥的100mL三角錐瓶底部，然后徐徐轉(zhuǎn)動(dòng)三角瓶，使火棉膠由底部至瓶口均勻分布于瓶內(nèi)壁，同時(shí)棄去多余的火棉膠，將三角瓶倒置，自然風(fēng)干10min。小心剝離三角瓶口薄膠，引自來水沿瓶內(nèi)壁與袋膜間流入，使透析袋與瓶壁逐漸分離，取出透析袋，同時(shí)檢查透析袋的完好性。
2、透析 把10mL氯化鈉蛋清液注入透析袋內(nèi)，扎緊透析袋頂部，系于一橫放在盛有蒸餾水的燒杯的玻璃棒上，調(diào)節(jié)水位使透析袋*浸沒蒸餾水中。
3、透析情況檢驗(yàn)
（1）無機(jī)鹽透析檢驗(yàn)：透析10 min后，自燒杯中取透析用水2 mL于試管中，用1%AgNO3檢驗(yàn)氯離子是否能被透析出。
（2）蛋白質(zhì)透析檢驗(yàn)：自燒杯中另取透析用水2 mL于試管中，加入2 mL 10%NaOH，搖勻，再加1%CuSO4數(shù)滴，進(jìn)行雙縮脲反應(yīng)，檢驗(yàn)蛋白質(zhì)是否被透析出。
（3）不斷更換燒杯中的蒸餾水以加速透析進(jìn)行，經(jīng)數(shù)小時(shí)侯燒杯中的水不再有氯離子檢出為止，則表明透析完成。因?yàn)榈扒迦芤褐械那宓鞍撞蝗苡诩兯藭r(shí)可觀察到透析袋中有蛋白沉淀出現(xiàn)。
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論分析。
四、思考題
1、制作透析袋時(shí)能否用采用熱風(fēng)干燥加速其成膜？為什么？
2、高濃度的硫酸銨對(duì)蛋白質(zhì)溶解度有何影響，為什么？
3、鹽析與透析在蛋白質(zhì)、生物酶提取純化中的意義。
4、蛋白質(zhì)可逆沉淀反應(yīng)與不可逆沉淀反應(yīng)的區(qū)別在哪里？舉例說明。