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當前位置：上海士鋒生物科技有限公司>>技術文章>>實驗如何制備抗免疫球蛋白Ig抗體
（一）抗原制備
Ig是免疫球蛋白，對異種動物而言，是良好的抗原物質。可以刺激異種動物產生抗Ig血清，經適當提取后，產生抗Ig抗體，又叫第二抗體或抗抗體。在多數的間接標記反應中，均需制備抗Ig抗體。
（二）材料與試劑
1.提取的動物Ig
2.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
3.和
4.實驗動物 兔
5.其它材料及試劑
（三）操作方法
1.免疫方法 可以采用以下各種方法之一進行免疫。
（1）淋巴結注射法：①在兔的兩后足跖部皮下（或皮內）注射活卡介苗50mg（每側約0.30ml）。7～10天后，兔跖及腘肌淋巴結腫大;②于腫大的兩側淋巴結內各注射加有*佐劑的IgG乳化抗原0.50ml（含IgG 5mg/ml、1 000U/ml、1 000μg/ml）;③必要時，14天后，重復步驟②一次;④再過7天后，于兩側淋巴結內各注射加有*佐劑的IgG乳化抗原0.50ml（含IgG5mg/ml、1 000U/ml、1 000μg/ml）;⑤5～7天后，耳靜脈采血。測定血清效價。
（2）皮下多點注射法：①家兔兩側掌（跖內各注射含有*佐劑抗原0.10ml（IgG含量5mg/ml）;②7～10天后，脊柱兩側多點（頸、胸、腰椎各兩點、共6點）皮下注射含不*佐劑的抗原，每點0.50ml;③7～10天后，脊柱兩側重復注射一次;④7～10天后試血。不合格者重復步驟③。
（3）多途徑聯合注射法：①兩側掌（跖）內側皮下注射含*佐劑抗原0.50ml（IgG量為5mg/ml）;②14天后，多點皮下注射含有不*佐劑抗原;③7天后，耳靜脈注射不含佐劑的抗原2ml;④測定血清抗體效價，不合格者重復步驟③，并適當遞增IgG量。
2.效價測定 采用瓊脂擴散法。
（1）將血清倍比稀釋，加入外周孔。
（2） 中間孔加動物Ig。
（3） 37℃濕盒瓊擴24小時，觀察結果。
（四）結果判定
1.抗Ig的效價測定 瓊脂擴散效價達1﹕16或1﹕32者為合格。
2.純度鑒定 采用瓊擴法。中間孔加抗Ig血清，外周孔加Ig和標準品Ig。在抗Ig與Ig以及標準品Ig均出現一條沉淀線，且這兩條沉淀線相互融合者，說明提取的Ig是純的。
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