如何使用雙縮脲試劑測定蛋白質含量

時間：2013/8/13閱讀：2134

一、原理：蛋白質含有兩個以上的肽鍵，因此有雙縮脲反應。雙縮脲反應是指蛋白質在堿性溶液中與二價銅離子結合，生成紫紅色絡合物的反應。其顏色的深淺與蛋白質的含量成正比，而與蛋白質的相對分子質量和氨基酸的組成無關。

二、材料與試劑

雙縮脲試劑：稱取1.50g五水硫酸銅和6.0g酒石酸鉀鈉（四水），用500ml左右的蒸餾水溶解，在攪拌下加入300ml10%氫氧化鈉溶液，定容至1L,儲存于塑料瓶中。可使用。若出現黑點或紅色沉淀時，則不能再用。加入0.1%KI可防止銅的析出。

1%標準酪蛋白溶液：用0.05M氫氧化鈉溶液配制，酪蛋白的純度可用微量凱氏定氮法。

試管、分光光度計

三、操作過程

1、標準曲線的制作：于試管中分別加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml的1%標準酪蛋白溶液，用水補足1ml。然后各加入4ml雙縮脲試劑，充分搖勻在室溫下反應30min，于540nm波長下測定光吸收率。以酪蛋白的含量為橫坐標，光吸收值為縱坐標，繪制標準曲線。

2、樣品測定

取樣品溶液1ml加入4ml雙縮脲試劑，搖勻后在室溫下反應30min，測定光吸收值，從標準曲線查出蛋白質含量。

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