士鋒生物凝膠層析法蛋白質(zhì)脫鹽

時(shí)間：2013/9/29閱讀：948

一、原理：含鹽蛋白質(zhì)溶液流經(jīng)凝膠層析柱時(shí)，低相對分子量的鹽分子因浸入凝膠顆粒的微孔中，所以向下移動(dòng)的速度較慢；而大分子的蛋白質(zhì)不能進(jìn)入凝膠顆粒的微孔，以較快的速度流過凝膠柱，從而使蛋白質(zhì)與鹽分開。
二、材料與試劑：葡聚糖凝膠（Sephadex G25）、洗脫液（蒸餾水或適宜的緩沖溶液）、含鹽的蛋白質(zhì)溶液、蛋白質(zhì)檢測試劑、無機(jī)鹽檢測試劑（依具體情況而定）
三、操作方法
1、凝膠的準(zhǔn)備：稱取葡聚糖5g，加入80ml洗脫液（可用水或適宜的緩沖液），在沸水浴中溶脹30min，用傾瀉去懸浮的小顆粒。然后裝進(jìn)內(nèi)徑1－1.2cm，高30－40cm的玻璃柱內(nèi)。注意裝填均勻，無氣泡和裂紋存在，并保持液面在凝膠表面以上。
2、加樣與洗脫：打開柱的出口，讓柱內(nèi)的液體慢慢流出，直至液面與凝膠床表面相平，然后加入2ml含鹽蛋白質(zhì)溶液，至樣品液面剛好到達(dá)凝膠床表面時(shí)，加入30ml洗脫液（與溶脹和裝柱時(shí)所用液體*相同），以0.5－1ml/min的流速洗脫，每5ml裝試管分布收集。
3、收集的蛋白質(zhì)溶液可用280nm處的紫外光吸收法檢測，也可用福林酚測定。而鹽根據(jù)具體的鹽確定檢測方法。

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