細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)(Cell mediated immune, CMI)在機(jī)體抗感染及抗腫瘤免疫、移植排斥反應(yīng)和自身免疫病中發(fā)揮重要的作用。CMI的主要效應(yīng)細(xì)胞之一為細(xì)胞毒T淋細(xì)胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)。目前在醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)與臨床研究中重視CTL活性測定,將其作為了解機(jī)體細(xì)胞免疫功能和探索疾病機(jī)理的重要方法之一。
經(jīng)文學(xué)事業(yè)上的資助者的CTL活性測定方法為51鉻(Cr)釋放法,本法結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好,但也存在以下不足:①使用放射性的51Cr不利于安全操作及廢物處置,且需特殊測定儀器;②51Cr自發(fā)釋放率高,常因不同靶細(xì)胞標(biāo)記效率變化差別大而影響結(jié)果判定;③51Cr半衰期(27.8天),無法用于需多次測定的動物試驗;④細(xì)胞共育時間短而試驗操作步驟多,不能在單個細(xì)胞水平進(jìn)行測定。因此多年來人們一直試圖尋找可以替代51Cr釋放法的CTL活性測定方法,如采用熒光標(biāo)記、流式細(xì)胞分析和報告基因等技術(shù)的靈敏可靠、簡單易行的非同位素測定法。
1 熒光測定法
1.1 測定法
1.1.1 alamarBlue一步熒光測定法