士鋒生物DNA的瓊脂糖凝膠電泳

時間：2014/4/15閱讀：890

一、原理
DNA在堿性的溶液中帶有負電荷，因此，在電場作用下朝正極移動。在瓊脂糖凝膠中電泳時，由于瓊脂糖凝膠具有一定孔徑，長度不同的DNA分子由于所受凝膠的阻遏作用大小不一，遷移的速度不同，從而可以按照分子量大小得到有效分離。溴化乙錠可插入到DNA分子的雙鏈中。在紫外光的照射下，插入溴化乙錠的DNA呈橙紅色熒光，所以溴化乙錠可以作熒光指示劑指示DNA含量和位置。

二、材料、儀器設備及試劑
（一）材料：分子量不同的dna片段。
（二）儀器設備：1. 電泳儀；2. 紫外檢測儀；3. 水平電泳槽；4. 移液器；5. 一次性手套。
（三）試劑： 1. pH8.3 Tris－硼酸－EDTA緩沖液：稱取10.78gTris，5.500g硼酸，0.930gEDTA－Na2溶于無離子水，定容到100ml，用時稀釋10倍；2. EB溶液：溴化乙錠（10mg/ml）（用時稀釋10倍）；3. 加樣緩沖液：50％甘油＋0.25％溴酚藍；4. 瓊脂糖。

三、實驗步驟
（一）瓊脂糖凝膠的制備：1. 稱取瓊脂糖1g，加入10倍電泳緩沖液10ml，再加入蒸餾水90ml，在電爐上加熱溶解，配制成1％瓊脂糖凝膠；稍涼后加入配好的EB溶液數(shù)滴。2. 將電泳模板兩端密封，倒入瓊脂糖凝膠溶液，插入梳子。3. 冷凝后將梳子撥出，電泳膠放入電泳槽中。
（二）加樣：取樣品溶液20μl，加入1／5體積加樣緩沖液，混勻后，將溶液加到樣品孔中，同時在另一樣品孔中加入標準分子量DNA。一般DNA樣品控制在0.5～1.0μg之間。
（三）電泳：加入pH8.3Tris－硼酸－EDTA緩沖液，通電維持2～4V／cm，電泳至溴酚藍走到膠底部邊緣時停止電泳。
（四）染色及觀察：電泳完畢，取出凝膠模具，將其推到一塊干凈的玻璃板上，于254nm或300nm波長紫外燈下觀察，DNA存在的位置呈現(xiàn)橙黃色熒光，放置時間超過4～6h后熒光減弱，因此應立即用用國產(chǎn)全色膠卷拍照，并應加上紅色濾色鏡。

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