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士鋒生物甲醛滴定法測定氨基酸含量

時間:2014/5/8閱讀:1180
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二、原理 
水溶液中的氨基酸為兼性離子,因而不能直接用堿滴定氨基酸的羧基。甲醛可與氨基酸上的—N+H3結合,形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2 等羥甲基衍生物,使N+H3上的H+游離出來,這樣就可以用堿滴定N+H3放出H +,測出氨基氮,從而計算氨基酸的含量。 
若樣品中只含有單一的已知氨基酸,則可由此法滴定的結果算出氨基酸的含量。若樣品中含有多種氨基酸(如蛋白質水解液),測不能由此法算出氨基酸的含量。 
與甲醛作用后,生成的化合物不穩定,導致滴定后結果偏低;含酚基結構,導致滴定結果偏高。 

三、材料、試劑與器具 
(一)試劑 
1、0.5%酒精溶液 
稱0.5g溶于100ml60%酒精中。 
2、0.05%溴藍溶液 
取0.05溴麝行草酚藍溶于100ml 20%乙醇溶液中。 
3、1%溶液 
取1g溶于100ml蒸餾水。 
4、標準0.100mol/L 氫氧化鈉溶液 
5、中性甲本醛溶液 
取50ml,加0.5%指示劑約3ml,滴加0.1mol/LnaOH溶液,使溶液呈微粉紅色,臨用前中和。 
(二)實驗器具 
1、錐形瓶 2、堿式滴定管 
1、 移液管洗耳球 4、天平 
5、容量瓶 6、試劑瓶 
7、量筒 8、玻棒與燒杯 

四、操作步驟 
1、取3只100ml錐形瓶,按下表加入試劑。
甲醛滴定法測定氨基酸含量
2、混勻后用標準0.100mol/L氫氧化鈉溶液滴定至紫色(pH8.7~9.0)
3、結果計算
每毫升氨基酸溶液中含氨基氮的毫克數為

五、注意事項 
利用甲醛滴淀法可以用來測定蛋白質的水解程度。隨著蛋白質水解度的增加,滴定值也增加,當蛋白質水解完成后,滴定值不再增加。

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