一、原理:微生物細(xì)胞在超聲波的作用下,細(xì)胞結(jié)構(gòu)受到破壞,而使細(xì)胞破碎。
二、材料與試劑:超聲波破碎儀、顯微鏡、燒杯、細(xì)胞破碎緩沖液(10mmol/L,PH7.4Tris-HCL緩沖液中含5mmol/L的MgCL2)、細(xì)胞懸浮液(取50-100mg)大腸桿菌濕細(xì)胞懸浮在1ml細(xì)胞破碎緩沖液中)、培養(yǎng)基(牛肉膏0.5%、蛋白胨1%,NaCL0.5%制成肉湯液體培養(yǎng)基。取上述肉湯培養(yǎng)基加進(jìn)2%瓊脂,制成固體培養(yǎng)基,用作菌種活化與保藏)。
三、操作方法
1、細(xì)胞培養(yǎng)和收集:將活化菌種接入肉湯培養(yǎng)基中,于37℃振蕩培養(yǎng)。當(dāng)?shù)竭_(dá)對(duì)數(shù)生后(約6h),用離心機(jī)收集細(xì)胞,8000r/min離心5min,或3000r/min離心20min。
2、在顯微鏡下觀察細(xì)菌的形態(tài)特征。
3、細(xì)胞破碎:取濕細(xì)胞50-100mg懸浮于1ml細(xì)胞破碎緩沖液中。用20kHz頻率,150W的功率,在冰浴中進(jìn)行超聲波破碎,每破碎60s,間隔60s,反復(fù)破碎三次。
4、在顯微鏡下觀察破碎后的細(xì)胞形態(tài)。