原代培養(yǎng)人前脂肪細(xì)胞的培養(yǎng)

時(shí)間：2014/11/10閱讀：756

材料與試劑：
鑷子、剪子、培養(yǎng)皿
離心管、培養(yǎng)瓶、吸管、滴管
200目篩網(wǎng)
膠原酶（10ml）（20mg膠原酶、200mg牛血清白蛋白、10毫升雙蒸水）國(guó)外也用培養(yǎng)基配.
方法：
1、取無(wú)菌條件下新鮮切除的人腹部皮下脂肪組織約5－10克，放入培養(yǎng)皿，用1×PBS沖洗2－3次，充分洗去血污，剔除結(jié)締組織和可見(jiàn)血管。
2、充分剪碎脂肪組織為1mm×1mm的小塊。
3、將其加入到含有5毫升膠原酶的離心管里，37度水浴振蕩消化1小時(shí)。
4、將含有組織的消化液加入到有10毫升DMEM/F12培養(yǎng)基的離心管中，并且使用吸管反復(fù)吹打使組織塊分散，然后通過(guò)孔徑25μM（200目）的篩網(wǎng)過(guò)濾，收集濾液和未過(guò)濾的組織塊。
5、將濾液以600g離心5分鐘棄上清，加入原代培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液。
6、將未濾過(guò)的組織按照上述過(guò)程再處理一次，將倆次獲得的細(xì)胞懸液混勻計(jì)數(shù)，按照104個(gè)/cm2的密度接種于培養(yǎng)瓶里，于37度，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
接種12－16小時(shí)基本貼壁。在增殖狀態(tài)下的前脂肪細(xì)胞可以使用消化的方法傳代，并且可以凍存和復(fù)蘇。

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