轉(zhuǎn)管培養(yǎng)法(roller tube culture)是Gey 提出的,實驗室常用,為了擴大細(xì)胞產(chǎn)量,將試管改用轉(zhuǎn)瓶,故稱轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng),其培養(yǎng)方法是一樣的,試管或轉(zhuǎn)瓶固定在支加上,傾斜度為5°~10°左右,或?qū)⑥D(zhuǎn)瓶放在一排排轉(zhuǎn)軸之間,使轉(zhuǎn)瓶隨著轉(zhuǎn)軸以每小時6~12 轉(zhuǎn)緩慢轉(zhuǎn)動。細(xì)胞貼附于玻璃壁四周,細(xì)胞貼壁和生長只有一個表面面積,經(jīng)轉(zhuǎn)動一方面使培養(yǎng)液流動,利于細(xì)胞吸收營養(yǎng)和進行代謝,一方面使細(xì)胞有機會接觸氣體,有利于細(xì)胞呼吸和發(fā)生氧化還原作用,有利于細(xì)胞生長繁殖。培養(yǎng)瓶(管)內(nèi)保持有相當(dāng)大的上方空間,以維持合適的氧和pH 水平,通過轉(zhuǎn)動可使細(xì)胞交替接觸培養(yǎng)液和空氣,營養(yǎng)可被充分利用。若需增加細(xì)胞產(chǎn)量,除可在增加轉(zhuǎn)瓶的數(shù)量和容積外,使瓶直徑盡可能小,此時表面面積可因直徑或長度的倍增而成倍增加。
轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)也可使用灌注培養(yǎng)系統(tǒng),因此系統(tǒng)需要錯綜復(fù)雜回旋的可連續(xù)供應(yīng)的管道進入瓶內(nèi),這是一種昂貴的選擇。
[實驗程序]:
本程序是在1400cm2(23×12cm)一次性塑料瓶上使用的(Corning 或Becton Dickinson)程序。
1、加入300ml生產(chǎn)培養(yǎng)液于轉(zhuǎn)瓶中。
2、加入1.5×107細(xì)胞。
3、在37℃下,以12轉(zhuǎn)/小時,轉(zhuǎn)動2小時,使細(xì)胞均勻貼壁。
4、減少轉(zhuǎn)動速度至5 轉(zhuǎn)/小時并連續(xù)培養(yǎng)。
5、在倒置顯微鏡下使用長焦距物鏡檢查細(xì)胞。
6、在細(xì)胞生長至明顯匯合時(5~6天),移出培養(yǎng)液,加入0.25%,并滾動轉(zhuǎn)瓶以收獲細(xì)胞。洗去,加入新鮮培養(yǎng)基,可轉(zhuǎn)入擴大再培養(yǎng)。為了增加表面積,有人將轉(zhuǎn)瓶表面制成帶皺紋的表面或插入多層隔板。以增加表面積。