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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
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抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

士鋒PPO活性測定

時間:2015/7/10閱讀:766
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一、原理與方法

PPO催化各種酚與O2氧化為醌。本實驗是采用鄰苯二酚為底物,在0.2M-0.1M檸檬酸緩沖液PH5.8的反應(yīng)體系中,PPO催化鄰苯二酚形成褐色的醌,在分光光度計410nm處使反應(yīng)體系的OD值產(chǎn)生變化,通過OD值上升的讀數(shù)變化確定PPO的酶活大小。

其方法是:在含有4mlPH5.8的0.2M-0.1M檸檬酸緩沖液試管中加入0.05ml0.05M鄰苯二酚溶液,在30℃恒溫水浴中預(yù)熱后加入0.05ml酶液,反應(yīng)5分鐘,在分光光度計410nm處讀取吸光值。在上述條件下,以A410讀數(shù),以每分鐘增加0.01O.D.值定義為一個酶活性單位(U)。

二、儀器與試劑

(1)樣品:

多酚氧化酶粗酶液

硫酸銨沉淀組分

DE-52洗脫組分

葡聚糖凝膠洗脫組分

(2)底物:

鄰苯二酚:O.01M鄰苯二酚溶液

(3)反應(yīng)體系:

0.2M鄰酸二氫鈉-0.1M檸檬酸緩沖液PH5.8

(4)器皿與儀器:

試管、恒溫水浴等

分光光度計

三、酶蛋白的比活性

比活性=酶活單位(U)/mg蛋白質(zhì)

四、實驗結(jié)果與分析

1. Sephadex G-200的洗脫組分的相對濃度(OD590)和相對酶活(OD410)

結(jié)果列表

試管號 蛋白質(zhì)濃度 PPO酶活 試管號 蛋白質(zhì)濃度 PPO酶活

空白 0 0 3 0.16 0.09

粗酶液 0.20 0.14 4 0.03 0.03

1 0.00 0.01 5 0.03 0.01

2 0.13 0.09 6 0.02 0.02

分析:2和3試管中含絕大部分所需蛋白,保存進(jìn)行下一步純化。

2. DE-52的洗脫組分的相對濃度(OD590)和相對酶活(OD410)

結(jié)果列表

試管號 蛋白質(zhì)濃度 PPO酶活 試管號 蛋白質(zhì)濃度 PPO酶活

空白 0 0 3 0.03 0.05

粗酶液 0.22 0.16 4 0.09 0.05

1 0.00 0.00 5 0.07 0.02

2 0.03 0.02 6 0.03 0.00

分析:酶活性高低不一定與蛋白含量高低成正比,3和4試管中含較多所需蛋白。

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