在眾多導致人類疾病的基因有義突變、病原體亞型以及耐藥基因的有義突變中，單堿基突變占了相當大的比例，其檢測方法的探索一直是基因診斷研究中的重要課題。本文著重介紹了幾種近年發(fā)展起來的新技術(shù)：反向限制性位點突變分析(iRSM)、熒光PCR（SYBR Green I結(jié)合熔解曲線分析技術(shù)、熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)結(jié)合探針熔解曲線分析技術(shù)）、基因芯片、等位基因特異性擴增技術(shù)(ASPCR)。 關(guān)鍵詞：聚合酶鏈式反應 點突變 Tm值 熒光 基因芯片 等位基因 隨著人類基因圖譜草圖的公布和各種病原體基因序列的揭示，這都將的促進疾病相關(guān)基因的結(jié)構(gòu)和功能研究，特別是基因缺失、錯位、突變（有義突變）等與疾病的關(guān)系。在眾多導致人類疾病的基因有義突變、病原體亞型以及耐藥基因的有義突變中，單堿基突變占了相當大的比例[1]，其檢測方法的探索一直是基因診斷研究中的重要課題，特別是對已知有義突變的檢測，將是臨床進行基因診斷的重要手段之一。PCR擴增技術(shù)問世以來，建立于擴增基礎(chǔ)上的突變檢測技術(shù)使檢測靶DNA（目的DNA）含量和/或突變靶序列比例過低、檢測靈敏度不足等難題得以克服，使得分子診斷技術(shù)進入了新階段。在過去十多年中，曾出現(xiàn)了諸如經(jīng)典的PCR-RFLP、ASO以及OLA、COP、PEX等點突變的檢測方法，本文將對近年來發(fā)展起來的對已知點突變分析方法進行綜述。⒈ 反向限制性位點突變分析（inverse restriction site mutation , iRSM） 1978年Kan和 Dozy創(chuàng)立的限制性片斷長度多態(tài)性（restriction fragment length
polymorphism , RFLP)連瑣分析技術(shù)是zui早用于分析已知點突變的方法。其檢測特點是：具有較高的特異性，可以確定突變的部位及性質(zhì)，重復性好。但不足之處是僅適合于多態(tài)性的檢測：即突變頻率大于1%才能被檢測到；因此，RFLP分析對于檢測突變的早期，尤其是在野生型遠多于突變型時其敏感性就顯得不足了[2]。