巨噬細胞培養(yǎng)

時間：2014-9-23閱讀：660

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噬細胞屬免疫細胞，有多種功能，是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。巨噬細胞容易獲得，便于培養(yǎng)，并可進行純化。巨噬細胞屬不繁殖細胞群，在條件適宜下可生活 2 － 3 周，多用做原代培養(yǎng)，難以生存。我愛生物 5ibio

巨噬細胞也建有無限細胞系，大多來自小鼠，如 P338D1 、 S774A.1 、 RAW309Cr.l 等，均獲惡性，培養(yǎng)中呈巨噬細胞形態(tài)和吞噬功能，易于傳代和瓶壁分離，但難以建株。

培養(yǎng)巨噬細胞可用各樣方法和各種來源來獲取細胞，以小鼠腹腔取材法zui為實用，其法如下：

1、實驗前三天，向小鼠腹腔內(nèi)注入無菌硫羥乙酸肉湯 lml （勿注入腸內(nèi)！），以刺流產(chǎn)生大量的巨噬細胞。生物實驗網(wǎng)

2、引頸處死小鼠。

3、手提鼠尾將其全浸入 70% 乙醇中 3 － 5 秒。做zui大zui全的生物試驗方法

4、置動物于解剖臺，用針頭固定四肢，持鑷撕開腹部皮膚，但勿傷及腹膜壁，把皮膚拉向上下兩側，暴露出腹膜壁。

5、用 70% 酒精擦洗腹膜壁，注射器吸 10ml Eagle 液注入腹腔中，同時用手指從兩側壓揉腹膜壁，使液體在腹腔內(nèi)流動。

6、用針頭輕挑起腹壁并微傾向一側．使腹腔中液體集中于針頭下吸取入針管內(nèi)。

7、小心拔出針頭，把液體注入離心管。做zui大zui全的生物試驗方法

8、4 ℃下 250g 離心 10 分鐘后，去上清，加 10ml Eagle 培養(yǎng)基。

9、計數(shù)細胞。每只鼠可產(chǎn)生 20 一 30 × 106 細胞，其中 90% 為巨噬細胞。

10、以 3 × 105 個貼附細胞 / 平方厘米接種。

11、接種數(shù)小時后，除去培養(yǎng)液，可去除其它白細胞，純化培養(yǎng)細胞，用 Eagle 液沖洗 1 一 2 次，再加新 Eagle 培養(yǎng)液置 CO2 溫箱中。

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