一、大腸桿菌質(zhì)粒dna的提取
質(zhì)粒dna的提取是從事基因工程工作中的一項基本實驗技術(shù)，但提取方法有很多種，以下介紹一種zui常用的方法：
堿裂解法：此方法適用于小量質(zhì)粒dna的提取，提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、PCR擴增、銀染序列分析。方法如下：
1、接1%含質(zhì)粒的大腸桿菌細胞于2mllb培養(yǎng)基。
2、37℃振蕩培養(yǎng)過夜。
3、取1.5ml菌體于Ep管，以4000rpm離心3min，棄上清液。
4、加0.lml溶液I(1％葡萄糖，50mM/LEDTApH8.0，25mM/LTris-HClpH8.0)充分混合。
5、加入0.2ml溶液II(0.2mM/LNaOH，1％SDS)，輕輕翻轉(zhuǎn)混勻，置于冰浴5min。
6、加入0.15m1預(yù)冷溶液III(5mol/LKAc，pH4.8)，輕輕翻轉(zhuǎn)混勻，置于冰浴5min。
7、以10，000rpm離心20min，取上清液于另一新Ep管
8、加入等體積的異戊醇，混勻后于?0℃靜置10min。
9、再以10，000rpm離心20min，棄上清。
10、用70％乙醇0．5ml洗滌一次，抽干所有液體。
11、待沉淀干燥后，溶于0．05mlTE緩沖液中
煮沸法
1、將1.5ml培養(yǎng)液倒入eppendorf管中,4℃下12000ｇ離心30秒。
2、棄上清，將管倒置于衛(wèi)生紙上幾分鐘，使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120mlSTET溶液中,渦旋混勻。
4、加入10ml新配制的溶液(10mg/ml),渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。
8、取20ml進行電泳檢查。

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大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提取

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