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上海士鋒生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第14年

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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 維生素檢測(cè)培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測(cè)培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無(wú)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測(cè)培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測(cè)培養(yǎng)基 化妝品檢測(cè)培養(yǎng)基 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 支原體檢測(cè)培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測(cè)培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測(cè)培養(yǎng)基 弧菌檢測(cè)培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測(cè)培養(yǎng)基 檢測(cè)培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測(cè)培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測(cè),增菌培養(yǎng)基
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生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

銀染核仁形成區(qū)與近端著絲粒染色體隨體聯(lián)合

時(shí)間:2017-4-5閱讀:1233
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【實(shí)驗(yàn)原理】
人類近端著絲粒染色體的副縊痕與核仁形成有關(guān),故稱為核仁形成區(qū)(NOR)。當(dāng)位于此處的18S、28S核糖體RNA的基因(rDNA)具有轉(zhuǎn)錄活性時(shí),應(yīng)用銀染技術(shù)可使NOR特異性著色(褐黑色)。進(jìn)一步證明銀染物質(zhì)不是rDNA,亦不是rRNA,可能是核仁形成區(qū)特異的蛋白質(zhì),即和rRNA轉(zhuǎn)錄相的酸性蛋白。人類核糖體RNA基因位于5對(duì)近端著絲點(diǎn)染色體短臂的次猛痕處,即人類的核仁形成區(qū)。在正常人中, 不是所有核仁形成區(qū)均被銀染,其范圍大約4-10。應(yīng)用銀染法可以覺察正常人體核糖體RNA基因的活動(dòng)。此外,人類近端著絲粒染色體的隨體間易發(fā)生聯(lián)合,應(yīng)用銀染技術(shù)可在發(fā)生聯(lián)合的染色體間清楚地看到銀染物質(zhì)相連。因此,應(yīng)用銀染核仁形成區(qū)(Ag-NOR)與近端著絲粒染色體隨體聯(lián)合(Ag-AA)技術(shù),可以分析有活性的rRNA基因的動(dòng)態(tài)變化。正常人Ag-NOR平均為5.8/細(xì)胞。

【實(shí)驗(yàn)用品】
1. 恒溫水浴箱、顯微鏡、平皿、牙簽、擦鏡紙、鑷子;
2. 預(yù)制染色體玻片標(biāo)本、0.1%甲酸、AgNO3(50%)。1:20 Giemsa,5mol/L HCl。

【實(shí)驗(yàn)步驟】
1. 按半微量法采取外周靜脈血,接種培養(yǎng)。常規(guī)法制片。將染色體玻片標(biāo)本在室溫下放置2~3天。
2. 將標(biāo)本置入5mol/L HCl溶液中常溫處理5分鐘,蒸餾水沖洗2-3次,甩干。
3. 將500mg AgNO3溶于1 ml 0.1%甲酸溶液中,混勻后立即滴4~5(5ml)滴至玻片標(biāo)本上。
4. 在平皿中平行放置兩根牙簽,將玻片標(biāo)本放在牙簽上。
5. 在標(biāo)本上蓋一張比玻片稍小的擦鏡紙,用鑷子掀動(dòng)紙片數(shù)次,使染液均勻分散在標(biāo)本上。
6. 將平皿置于60℃水浴箱中處理3-5分鐘,直至擦鏡紙呈棕黃色終止反應(yīng)。
7. 蒸餾水沖洗去擦鏡紙,以1:20 Giemsa染液復(fù)染3分鐘。水洗,氣干。
8. 鏡下觀察。

【實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析】
1. Ag-NOR的計(jì)數(shù):選擇銀染著色清晰的分裂相,計(jì)數(shù)6個(gè)D組(13、14、和15號(hào)染色體)和4個(gè)G組(21和22號(hào)染色體)近端著絲粒染色體,不論單側(cè)或雙側(cè)的銀染點(diǎn)都計(jì)數(shù)為一個(gè)有銀染的染色體。
2. Ag-AA計(jì)數(shù):凡近端著絲粒染色體之間有銀染物質(zhì)相連的,均計(jì)數(shù)為Ag-AA。涉及2條近端著絲粒染色體的聯(lián)合,記為1個(gè)Ag-AA;涉及3條近端著絲粒染色體的聯(lián)合,如未形成閉環(huán)的,記為2個(gè)Ag-AA;3條染色體聯(lián)合形成閉環(huán)時(shí),記為3個(gè)Ag-AA;依此類推。
銀染核仁形成區(qū)與近端著絲粒染色體隨體聯(lián)合

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