會員1.png)
您所在位置：產(chǎn)品搜索
請輸入產(chǎn)品關(guān)鍵字：
聯(lián)系方式
地址：浙江省杭州市西湖區(qū)文二路319號西湖國際科技大廈5號樓中區(qū)3樓
郵編：310012
聯(lián)系人：采購部
留言：在線留言
商鋪：http://www.598km.com/st84879/
郵編：310012
聯(lián)系人：采購部
留言：在線留言
商鋪：http://www.598km.com/st84879/
技術(shù)文章
正常小鼠腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)
點(diǎn)擊次數(shù)：624 發(fā)布時(shí)間：2012-11-23
正常小鼠腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 腎組織：取自8周齡健康雌性小鼠；
2. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加200000IU/L*、200mg/L*，pH7.2；
3. 0.1%明膠：為生長基質(zhì)成分，在取材前先用它包被培養(yǎng)瓶的生長面；
4. 消化液：0.1%*溶液；
5. 培養(yǎng)液：DMEM培養(yǎng)液，補(bǔ)充20%的胎牛血清、成纖維細(xì)胞生長因子（α-FGF）2μg/ml、*100μg/ml、*100IU/ml、*100μg/ml；
6. 用于細(xì)胞鑒定的抗體：抗細(xì)胞角蛋白（cytokeratin）抗體、抗角蛋白（keratin）抗體、抗波形蛋白（vimentin）抗體、抗結(jié)蛋白（des min）抗體、抗α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscular actin，α-SMA）抗體；
7. 眼科剪、*等無菌消毒手術(shù)器械；
8. 網(wǎng)篩：100目、150目；
9. 離心管（15ml、50ml）；
實(shí)驗(yàn)方法：
1. 取材；
① 斷頸處死小鼠，在無菌條件下迅速取出腎臟，用生理鹽水沖洗干凈，剝離腎被膜；
② 切取腎皮質(zhì)，將皮質(zhì)*成2—3mm的細(xì)條。在100目不銹鋼網(wǎng)篩上輕輕研磨，并用生理鹽水沖洗，收集濾液。將濾液再用150目的網(wǎng)篩過濾，收集網(wǎng)篩上富含腎小管的間質(zhì)碎片；
③ 在倒置顯微鏡下觀察收集的間質(zhì)碎片，其中應(yīng)主要為腎小管節(jié)段。如果混有較多的腎小球，則須將收集到的間質(zhì)碎片再放置到150目網(wǎng)篩上沖洗，直至腎小管純度達(dá)98%以上后才進(jìn)行下面的步驟；
④ 用培養(yǎng)液懸浮收集的腎小管節(jié)段；
2. 接種與培養(yǎng)；
① 將腎小管節(jié)段懸液加入已用明膠包被的培養(yǎng)瓶內(nèi)。于37℃、5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每4—5d換液一次。
② 待細(xì)胞長滿瓶壁后，用0.1%*消化傳代。每4—5d傳代一次，通常連接傳代至第三代時(shí)即可獲得較純的成纖維細(xì)胞。一般可傳10代左右；