Western及IP細胞裂解液

產品簡介：

Ø         Western及IP細胞裂解液（Cell lysis buffer for Western and IP），是一種在非變性條件下裂解細胞的裂解液。本細胞裂解液裂解的細胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀（immunol precipitation，IP）和免疫共沉淀（co-IP）。

Ø         Western及IP細胞裂解液的主要成分為20mM Tris （pH7.5），150mM NaCl，1% Triton X-100，以及sodium pyrophosphate，βglycerophosphate，EDTA，Na3VO4，leupeptin等多種抑制劑。可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用。

Ø         用Western及IP細胞裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用森貝伽生物的BCA蛋白濃度測定試劑盒（P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S）測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

包裝清單：

保存條件：

-20℃保存，一年有效。

注意事項：

Ø         為取得*的使用效果，盡量避免過多的反復凍融。可以適當分裝后使用。

Ø         需自備PMSF。PMSF（ST506）可以向江萊訂購。

Ø         裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。

Ø         為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：

對于培養細胞樣品：

1.         融解Western及IP細胞裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。

2.         對于貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍（如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗）。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后，細胞就會被裂解。

對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解。大團的細胞較難裂解充分，而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸，相對比較容易裂解充分。

3.         充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入100微升裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到150微升或200微升。

對于組織樣品：

1.         把*切成細小的碎片。

2.         融解Western及IP細胞裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。

3.         按照每20毫克組織加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。）

4.         用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5.         充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

6.         如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

附：森貝伽生物的各種裂解液主要特點、差異和選擇

 首先請參考下表，了解各種裂解液的主要特點和差異。

Ø         用于普通的Western、IP或co-IP，我們推薦使用Western及IP細胞裂解液（P0013），該裂解液已被國內各大研究機構廣泛使用，用戶普遍反映很好。裂解細胞或組織后，沒有非常粘滯的透明狀DNA團塊形成，不必采用超聲處理等就可以非常理想地用于后續操作。另外該裂解液裂解的產物也適合用于磷酸化蛋白的Western檢測。 

Ø         對于某些特殊蛋白的IP，如果發現Western及IP細胞裂解液（P0013）效果不是非常理想，可以嘗試用RIPA裂解液（強、中或弱）或NP-40裂解液。如果發現IP的時候背景很高，即非特異的蛋白也被IP下來，則需要選用裂解強度較高的裂解液，例如RIPA裂解液（強或中）。如果發現目的蛋白無法被IP下來，則說明裂解液的強度過強，可以使用較為溫和的裂解液例如RIPA裂解液（弱）或NP-40裂解液。

Ø         對于某些難溶解蛋白的Western，如果發現Western及IP細胞裂解液（P0013）效果不是非常理想，可以嘗試使用裂解強度更高的裂解液例如RIPA裂解液（強、中）或SDS裂解液。