豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS），是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine Reproductive and RespiratorySyndrome Virus，PRRSV）引起的以母豬繁殖障礙及仔豬呼吸道疾病為特征的高度接觸性傳染病。本病自1987年報道以來，給養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失，我國也于1995年暴發(fā)PRRS。自2001年以來，我國許多地區(qū)爆發(fā)流行了一種原因不明的豬“高熱病"，之后一系列的研究證明，引起“高熱病"的主要病原為變異的高致病性的PRRSV，故將此病命名為高致病性豬繁殖與呼吸綜合征（Highly pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，HP-PRRS）。

     與PRRSV相比，HP-PRRSV在Nsp2基因編碼區(qū)的第1447~1449位和1597~1698位發(fā)生突變，即在Nsp2蛋白序列中第483位和535-563位有30個氨基酸的缺失，這一點成為鑒別二者的重要指標，通過檢測非結(jié)構蛋白抗體可區(qū)分由PRRSV與HP-PRRSV引起的感染，為臨床診斷提供輔助依據(jù)。實驗室的檢測PRRS感染的方法主要包括病毒分離、回歸本動物、過氧化物酶單層試驗(IPMA)、血清中和實驗(SN)、免疫熒光實驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELlSA)、RT-PCR等，這些仍然是監(jiān)測PRRS并輔助檢測的重要方法，但現(xiàn)有的診斷方法費時費力，不適用于快速臨床檢測或大量檢測，而且能快速區(qū)分PRRS和HP-PRRS的診斷方法尚少，因此研制出簡便、特異并快速的診斷方法十分必要。我國目前應用的PRRS疫苗主要是滅活疫苗和弱毒疫苗，但在種豬場中只能利用滅活疫苗，以避免毒力返強、傳毒、散毒以及垂直感染。

     因此，建立一種可區(qū)分野毒感染和疫苗免疫抗體性質(zhì)的快速現(xiàn)場應用的診斷方法勢在必行，為臨床綜合防控HP-PRRS、種豬凈化以及分子流行病學調(diào)查提供技術方法。本實驗通過合成HP-PRRSV在Nsp2蛋白中缺失的30個氨基酸的多肽，并應用該多肽制備相應的單克隆抗體（簡稱為缺失段Nsp2單抗）1E9，并應用1E9單克隆抗體研制了可用于快速、特異區(qū)分PRRSV感染和HP-PRRSV感染的液相阻斷ELISA試劑盒及免疫膠體金診斷試紙條。本實驗中的液相阻斷ELISA方法在檢測過程中對HP-PRRSV、CSFV、PPV、PRV、SI抗血清均無交叉反應，該方法可檢測的陽性血清zui高稀釋度為1:20。

     應用液相阻斷ELISA試劑盒對220份本地血清樣品及對應病料進行檢測，結(jié)果顯示阻斷ELISA試劑盒檢測陽性率為53.2%，商品化ELISA試劑盒檢測陽性率為69.5%；而由商品化ELISA試劑盒檢測為陰性的樣品，液相阻斷ELISA試劑盒檢測結(jié)果亦為陰性；兩試劑盒的差異樣品數(shù)共36份，經(jīng)RT-PCR鑒定其中的11份樣品為HP-PRRSV感染豬血清，而其余25份樣品為經(jīng)過PRRSV滅活疫苗免疫豬血清。

     本實驗中的膠體金診斷試紙條在檢測過程中對HP-PRRSV、CSFV、PPV、PRV、SI抗血清均無交叉反應，該方法可檢測的陽性血清zui高稀釋度為1:10。應用膠體金診斷試紙條對100份血清樣品及對應病料進行檢測，結(jié)果顯示膠體金診斷試紙條與商品化ELISA試劑盒共同陽性樣品數(shù)為59，共同陰性樣品數(shù)為35，免疫膠體金診斷試紙條檢測為陰性而試劑盒檢測為陽性的樣品數(shù)為6。本課題所研制的液相阻斷ELISA方法對該100份樣品的檢測結(jié)果與該試紙條的檢測結(jié)果相符。通過臨床對本地血清樣品的檢測，結(jié)果顯示兩種檢測方法的檢測結(jié)果基本可信，可推廣應用于種豬場定期的血清學監(jiān)測、及時排除陽性（即PRRSV感染或注射活毒疫苗）種豬，剔除帶毒豬，防止疫源地擴大，并及時采用有效防治措施。