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兔一氧化氮(NO)ELISA試劑盒實驗步驟說明

時間:2014/9/23閱讀:636
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兔一氧化氮(NO)ELISA試劑盒實驗步驟說明

.標準品的稀釋:兔一氧化氮(NO)ELISA試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

40μmol/L

5號標準品

50μl的原倍標準品加入50μl標準品稀釋液

20μmol/L

4號標準品

50μl5號標準品加入50μl標準品稀釋液

0μmol/L

3號標準品

50μl4號標準品加入50μl標準品稀釋液

5μmol/L

2號標準品

50μl3號標準品加入50μl標準品稀釋液

2.5μmol/L

號標準品

50μl2號標準品加入50μl標準品稀釋液

2.加樣:兔一氧化氮(NO)ELISA試劑盒分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品0μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.溫育:用封板膜封板后置37溫育30分鐘。  

4.配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6.加酶:兔一氧化氮(NO)ELISA試劑盒每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7.溫育:操作同3

8.洗滌:操作同5

9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色5分鐘.

0.終止:兔一氧化氮(NO)ELISA試劑盒每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后5分鐘以內進行。

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