小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子（CRF）試劑盒簡介
　　
　　檢測范圍：0ng/L-400ng/L
　　
　　本試劑盒僅供科研使用
　　
　　實驗原理
　　
　　小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子CRF應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子（CRF）水平。用純化的小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子（CRF）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子（CRF），再與HRP標(biāo)記的促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子（CRF）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子（CRF）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子（CRF）濃度。
　　
　　操作步驟
　　
　　.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子CRF提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
　　
　　400ng/L5號標(biāo)準(zhǔn)品50μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
　　
　　200ng/L4號標(biāo)準(zhǔn)品50μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
　　
　　00ng/L3號標(biāo)準(zhǔn)品50μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
　　
　　50ng/L2號標(biāo)準(zhǔn)品50μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
　　
　　25ng/L號標(biāo)準(zhǔn)品50μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
　　
　　2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品0μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
　　
　　3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
　　
　　4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
　　
　　5.洗滌：小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子CRF小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
　　
　　6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
　　
　　7.溫育：操作同3。
　　
　　8.洗滌：操作同5。
　　
　　9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色5分鐘.
　　
　　0.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
　　
　　.測定：小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子CRF以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后5分鐘以內(nèi)進行。