豚鼠血清一氧化氮(NO)酶聯(lián)免疫（Elisa）試劑盒說明書原理:

采用競爭法測定小尾寒羊阿黑皮素原(POMC)水平。用小尾寒羊阿黑皮素原(POMC)抗原包被微孔板，制成固相載體，實驗

時依次在微孔板中加入標本及標準品，并加入 HRP 標記的POMC抗體，標本及標準品中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與

固相抗原結(jié)合。反復洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍色，再用硫酸終止反應，轉(zhuǎn)變成黃色。

標本中抗體量越多，結(jié)合在固相上的酶標抗體愈少，顏色越淺。顏色的深淺和樣品中的POMC含量呈負相關。采用酶標儀在

450nm 波長測定吸光度（OD 值），根據(jù)標準曲線，計算測試樣品中POMC濃度。

豚鼠血清一氧化氮(NO)酶聯(lián)免疫（Elisa）試劑盒說明書樣品收集、處理及保存

. 細胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液，以000×g離心5分鐘，收集上清。

2. 細胞：用PBS反復洗滌細胞3次，調(diào)整細胞濃度達到04-06/ml 左右，通過反復凍融，使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份，或

者細胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。

3. 血清：在室溫下，血液自然凝固，以000×g離心5分鐘，取上清待測。

4. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置0-20 分鐘后，以000×g離心5分鐘，收集上

清。

5. 體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以000×g離心5分鐘，收集上清。

6. 組織標本：切取組織標本，稱取重量0.5mg，加入500ul的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標本勻漿，以2000-3000

rmp離心20 分鐘，收集上清進行檢測。

7. 樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

8. 保存：如果樣品不能立即檢測，應將其分裝，-70 ℃保存，避免反復冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。血液標

本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

豚鼠血清一氧化氮(NO)酶聯(lián)免疫（Elisa）試劑盒說明書操作步驟：

. 取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。

2. 分組：取出 96 孔板，根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設標準

品組（6 個濃度）、空白孔、待測樣品組。

注：為減少實驗誤差，保證準確性，建議設置復孔。

3. 加樣：依照標準品的順序分別加入 00ul 的標準品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入 00ul 的蒸餾水；其余微孔中加入

00ul 的待測樣本。

4. 加酶標溶液：標準品組、待測樣本組各孔中加入 50ul 的酶標溶液（空白對照孔除外）。

5. 溫育：酶標板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育 小時。

6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置 5-30s，充分清洗酶標板 5 次，用吸水紙*拍干。

7. 顯色：各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后，再加入顯色劑 B 液 50ul。

8. 終止：25-37℃下避光反應 0-5 分鐘，加入 50ul 終止液。

9. 讀板：在 450nm 波長讀取各孔的 OD 值。

豚鼠血清一氧化氮(NO)酶聯(lián)免疫（Elisa）試劑盒說明書注意事項：

. 實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。

2. 加樣：加樣時，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔間的時間間隔過大，否則將會導致不同的預孵育時間，從而影響

實驗的準確性以及重復性。

3. 孵育：嚴格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進行。

4. 反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化，如果顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應。

5. 建議實驗前預測樣品含量，如樣品濃度過高，應對樣品進行稀釋，計算結(jié)果時乘以相應的稀釋倍數(shù)。

6. 建議使用本試劑盒時先做預實驗（即先做標準曲線，試用幾個標本），如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經(jīng)銷商，

如果因運輸過程導致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔產(chǎn)品本身以外的任何損失。

豚鼠血清一氧化氮(NO)酶聯(lián)免疫（Elisa）試劑盒說明書安全性

．避免人體直接接觸顯色劑A、B和終止液。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2．實驗中不要進食、抽煙或使用化妝品。

3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

保存條件及有效期：

.試劑盒保存：2-8℃

2.有效期：6個月