E（IgE）ELISA試劑盒檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被E（IgE）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的E（IgE）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，E（IgE）ELISA試劑盒操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心0分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心0分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心0分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品
酶標(biāo)儀（450nm）
高精度加樣器及槍頭：0.5-0uL、2-20uL、20-200uL、200-000uL
37℃恒溫箱

操作注意事項
試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
預(yù)處理后的樣本無需稀釋，直接取50μL加樣即可。
嚴(yán)格按照E（IgE）ELISA試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
所有液體組分使用前充分搖勻。