真核細胞的轉染

　　該操作以Invitrogen 公司的脂質體轉染試劑 LipofectAMINE為例,其它轉染 試劑可參照各自的使用說明書進行。

1.   在 6 孔板中接種 1-3×105 細胞/ 孔，加入 2ml *培養基，置CO2 孵箱中 37℃

培養過夜。

2.   待細胞長到 50-80%單層時，在無菌離心管中配制如下溶液：

溶液 A：將 1-2μg待轉染的超純 DNA 稀釋到 100μl 無血清培養基中

溶液 B：將 2-25μl  LipofectAMIN E 稀釋到 100μl 無血清培養基中

3.   混合溶液 A 和 B，輕輕混勻，室溫放置 15-45min。

4.   用 2ml 無血清培養基輕輕洗滌細胞，加入 0.8ml 無血清培養基/孔，將脂質體 復合物滴加到孔中，輕輕搖晃混勻，置 CO2 孵箱中 37℃孵育 2-24hr。

5.   用*培養基替換轉染液，繼續培養。

6.   24-72hr 后檢測蛋白質的表達或傳代并加入選擇性抗生素以篩選穩定表達株。