1、培養：支原體的培養37℃即可，當然，初次培養37℃，5%-10%co2效果更好。其中，解脲支原體生長比較快，用我所培養基，接種量104- 105ccu，培養16-18h即可達到對數生長期。人型，肺炎，24-48h即可達到對數生長期。
2、鑒定：主要靠菌落染色、生化反應及特異性生長抑制試驗等.
（1）Dienes菌落染色　　Dienes染色液：　　美藍 2.5g　　天青-Ⅱ 1.5g 　　麥芽糖 10g 　　碳酸鈉 0.5g 　　蒸餾水 100ml
染色時，直接吸染色液覆蓋菌落，1min后，用生理鹽水洗去染色液，低倍鏡下可見支原體菌落呈藍色，而其他菌菌落不著色。
（2）生化反應
根據不同采樣部位及對底物的分解或者作為能源，可以鑒別不同支原體。
解脲支原 分解尿素不分解*，生成NH3使培養基的ph升高，酚紅指示劑變紅。
人型支原體分解L-*不分解尿素，生成NH3使PH值升高，酚紅指示劑變紅。
肺炎和人型支原體分解葡萄糖，使pH降低，酚紅指示劑由紅變黃。
（3）在含0.002%美藍的培養基中肺炎支原體能生長且將美藍還原而退色，其他口腔、唾液或發酵支原體均被抑制生長，此法可鑒定肺炎支原體。
（4）分子生物學鑒定
由于支原體的基因文庫已建立，通過pcr擴增和基因探針技術可以對支原體進行鑒定。
如果要自己配制培養基，現提供幾種配方：
基礎培養基：Hayflick培養基（PPLO培養基），牛心粉 50g 蛋白胨 10g 氯化鈉 5g 加14g瓊脂粉為固體培養基
（1） 肺炎支原體培養基
基礎培養基 70ml　　牛血清 （滅活） 20ml　　25%的酵母浸液 10ml　　50%葡萄糖 1-2ml

0.4%酚紅 0.5ml　　* 0.001g　　* 10萬IU　　pH 7.8
（2）人型支原體培養基
基礎培養基 70ml　　馬血清 20ml 25%的酵母浸液 10ml　　30%L-* 0.33ml　　0.4%酚紅 0.5ml　　* 0.001g　　* 10萬IU　　pH 6.3
（3）解脲支原體培養基
基礎培養基 70ml　　馬血清 20ml　　25%的酵母浸液 10ml　　30%尿素0.33ml　　0.4%酚紅 0.5ml　　* 0.001g　　* 10萬IU 　　pH 6.0
注：由于支原體能在人工培養基上生長，但是營養要求較高，需要提供膽 固醇和酵母才能生長。以上配方中，馬（牛）.血清提供*，酵母浸液提供酵母。