一、分光光度計操作步驟

1、接通電源，打開儀器開關，掀開樣品室暗箱蓋，預熱10分鐘。  

2、將靈敏度開關調至“1”檔（若零點調節器調不到“0”時，需選用較。）

3、根據所需波長轉動波長選擇鈕。  

4、將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內，使空白管對準光路。  

5、在暗箱蓋開啟狀態下調節零點調節器，使讀數盤指針指向t=0處。  

6、蓋上暗箱蓋，調節“100”調節器，使空白管的t=100，指針穩定后逐步拉出樣品滑竿，分別讀出測定管的光密度值，并記錄。  

7、比色完畢，關上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。

二、分光光度計工作原理

    物質的吸收光譜本質上就是物質中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應地發生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結果。由于各種物質具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會相同。因此，每種物質就有其*的、固定的吸收光譜曲線，可根據吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎。分光光度分析就是根據物質的吸收光譜研究物質的成分、結構和物質間相互作用的有效手段。  

    又因為許多物質在紫外-可見光區有特征吸收峰，所以可用紫外分光光度法對這些物質分別進行測定（定量分析和定性分析）。紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律。   

    朗伯-比耳定律(Lambert－Beer)是光吸收的基本定律，俗稱光吸收定律，是分光光度法定量分析的依據和基礎。當入射光波長一定時，溶液的吸光度A是吸光物質的濃度C及吸收介質厚度l(吸收光程)的函數。  

    凡具有芳香環或共軛雙鍵結構的有機化合物，根據在特定吸收波長處所測得的吸收度，可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測定。

三、分光光度計注意事項  

1. 該儀器應放在干燥的房間內，使用時放置在堅固平穩的工作臺上，室內照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風，防止燈泡燈絲發亮不穩定。  
2. 使用本儀器前，使用者應該首先了解本儀器的結構和工作原理，以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應該對儀器的安全性能進行檢查，電源接線應牢固，通電也要良好，各個調節旋鈕的起始位置應該正確，然后再按通電源開關。  
3. 在儀器尚未接通電源時，電表指針必須于“0”刻線上，若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進行調節。