通用RT-PCR 試劑盒（AMV）

【資料簡介】

                          通用RT-PCR 試劑盒(AMV)
規(guī)格：50T/100T

保存：-20℃保存，避免反復(fù)凍融，復(fù)檢期為1 年

產(chǎn)品簡介：
本試劑盒適用于各種RNA 制品的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)以及隨后的PCR 擴(kuò)增。它采用AMV 進(jìn)行
反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，能夠獲得更長的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。同時，在25ul 反轉(zhuǎn)錄體系和50ul PCR 反應(yīng)體系
中，還可以一次性得到足夠量的PCR 產(chǎn)物用于后續(xù)的克隆實(shí)驗(yàn)。
本試劑盒中配置的酶均為進(jìn)口的酶。RT 酶采用進(jìn)口的AMV，所以cDNA 更長，基因的
信息保留得更完整！反轉(zhuǎn)錄過程中特異的RNase 抑制劑可有效降低由于外源RNase 污染而導(dǎo)
致實(shí)驗(yàn)失敗的風(fēng)險(xiǎn)。本試劑盒使用方便、快捷，可廣泛用于cDNA 克隆及目的基因檢測等分
子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

操作步驟：
一、反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
1、在冰浴的無菌無RNase 的離心管中加入如下反應(yīng)成分：
0.5ug RNA 模板
5ul Oligo(dT)16 引物
補(bǔ)RNase-free ddH2O 至11.5ul
2、70℃保溫5min 后迅速在冰上冷卻5min，簡短離心收集反應(yīng)液后加入以下各組分：
5ul 5×AMV Buffer
2.5ul dNTPs
0.5ul RNasin
0.5ul AMV
補(bǔ)RNase-free ddH2O 至25ul
3、42℃溫浴60min，如果是用隨機(jī)引物，請將離心管置37℃溫浴60min。
第2頁，共2 頁
4、反應(yīng)后將離心管置冰上，反應(yīng)產(chǎn)物可用于進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)或-20℃保存。
二、PCR 反應(yīng)
1、按以下各組分配制50ul PCR 反應(yīng)體系：
10×PCR Buffer 5ul
dNTPs 1ul
上游引物（用戶自備10um） 1ul
下游引物（用戶自備10um） 1ul
RT 反應(yīng)產(chǎn)物2ul
Taq Polymerase 0.5ul
ddH2O x ul
Total Volume 50ul
2、混勻后短暫離心，PCR 儀擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳觀察結(jié)果。

注意事項(xiàng)：
1、用于cDNA 合成反應(yīng)的相關(guān)試劑和耗材盡可能用DEPC 進(jìn)行處理，并在高壓滅菌后使用。
有些試劑不能高壓滅菌時，首先用經(jīng)過滅菌的器具、水等配制溶液后，再將溶液進(jìn)行過濾除
菌處理。
2、RNA 樣品要避免反復(fù)多次凍融，應(yīng)使RNA 在冰浴中處于融化狀態(tài)。
3、如果PCR 效果不理想，可以適當(dāng)優(yōu)化條件，比如改變退火溫度或增加模板量。