IHC實驗抗原修復的質量控制

【資料簡介】

正面臨標準化、量化的挑戰。例如腫瘤各種預后標記物的IHC檢測結果的評估，越來越需要進行表達間差異的定量分析，對腫瘤病人預后作出客觀、準確的判定。欲實現這一目標，必須對IHC的每一步進行標準化，才能保證對IHC的質量控制。作者認為，在整個IHC過程中，目前zui大的困難是IHC的抗原修復，也是影響IHCzui終結果的zui不穩定因素，各個實驗室都有自己*的方法，遠沒有達到初步的共識。欲實現IHC的質量控制，必須對AR進行質量控制，可以考慮從如下幾個方面進行。

首先，要想獲得一個滿意、可靠的IHC抗原修復的結果，必須對獲得結果的可靠性作出準確的評估，同時為證實結果是否可靠，必須結合該抗體的生物學特征，檢查標本的臨床資料，以及其他實驗獲得的結果，例如Western印跡、ISH等分子生物學方法和各種對照結果進行分析比較，制定一個合理、科學的抗原修復方法。

其次，每個從事IHC工作的人員（包括技術員和醫生）要了解被檢測抗原在組織細胞內的定位，這一點是很重要的，據此不但可以明確IHC染色結果是否可靠，而且可以調整抗原修復的方法和力度。許多的開拓性研究對蛋白質的定位是一種很重要的依據，可以根據形態學特點、生物學性質和其他相關領域的知識來確定定位的準確性。為了達到上述目的，對所檢測抗原性質的了解也很重要，例如活細胞系、新鮮組織和甲醛固定的石蠟包埋的細胞和組織的可比系統，再加上所掌握的蛋白質的生物學特性，就可以獲得比較的定位，據此判斷經抗原修復后其蛋白質定位的可靠性和真實性。

IHC的定位，不但對于臨床病理的輔助診斷、腫瘤預后的評估和指導治療具有十分重要的作用，而且對于科學研究也相當重要。zui近有些應該出現在核內表達的抗原，在有些檢測結果中頻繁出現在細胞漿內，例如p73、p16、p21war、p33lNGl、存活蛋白（sur—vivin）和細胞周期素等，根據實驗室經驗和所掌握的這些抗原的生物學特征，首先應該考慮是否是抗原修復這一環節出了問題，其次是否是抗體的質量有問題。

根據各自抗體的生物學特點不同，在檢測甲醛固定的石蠟切片時，應該制定一個*的抗原修復方案，具體原則如下：

①、首先要明確不是所有的抗原檢測都需用抗原修復；

②、不是所有的由甲醛固定引起的抗原結構改變都適合于常規AR，應該在調查研究的前提下制定一個*的抗原修復流程；

③、對于少量蛋白，用高溫（煮沸）不能檢測到IHC陽性結果，可采用較低溫度的熱處理，或與其他抗原暴露的方法相結合，例如熱修復和酶消化、熱修復和細胞穿透劑、兩種不同的修復介質或與高敏感的IHC方法相結合，以獲得*的染色結果。

原文地址:/biotech/Immunity/2011/g818582732