彩色免疫金銀染色方法

【資料簡介】

彩色免疫金銀染色方法（coloured IGSS,CIGSS）是由Frite和Hoenes等（1986）建立的一種新方法，劉彥仿等（1988）在《中華病理學雜志》上也報道了改進后的CIGSS方法。其基本原理是在IGSS法的基礎上，根據洗彩色照片的顯影原理而發展起來的，即IGSS后，在抗原位點處生成的銀顆粒經鐵氰化鉀與*的氧化反應，將銀顆粒氧化成溴化銀，后者與彩色顯影劑起還原反應，生成金屬銀，而彩色顯影劑本身則被氧化，其氧化產物使彩色成色劑由五色變成有色的染料，并沉積在銀顆粒的部位，金屬銀變成了銀離子。由于染料只能通過彩色顯影劑沉積在有銀的部位，不會發生非特異性背景染色。

一、操作步驟
（1）石蠟切片常規脫蠟至水。
（2）0.1%*37℃消化20min,或抗原修復20min（98℃），自然冷卻至室溫。
（3）0.05mol/L（pH7,4）TBS洗3×3min.
（4）1%EA（卵蛋白）15min,不洗。
（5）適當稀釋的特異抗體室溫4h或4℃孵育20h,或37℃孵育1h.
（6）0.05mol/L（pH7.4）TBS洗3×5min.
（7）0.02mol/L（pH7.4）TBS（內含0.1%BSA）洗10min.
（8）1%EA 15min,不洗，1:10-1:20稀釋的PAGlonm室溫孵育1h,或37℃孵育30min.
（9）0.05mol/L（pH7.4）TBS洗10min.
（10）1%戊二醛洗10min.
（11）雙蒸水洗5min.
（12）l%明膠洗5min.
（13）銀避光顯影（見銀顯影劑配方）8~15min
（14）雙蒸水洗15min.
（15）固定：用顯影定影液（1;4或1:10）固定5min,也可以用15%硫酸鈉-20%*混合液固定1-3min,或用1%戊二醛固定5rain，溫水洗3~6min.
（16）漂白：用2%鐵氰化鉀和1%*洗10min,雙重蒸餾水洗5rain.
（17）彩色顯影：用。-萘酚或菲尼酮或堿性品紅顯色2-4min,雙重蒸餾水洗5~10min.
（18）固定：2%*和1%亞硫酸鈉洗Stain.
（19）流水沖洗。
（20）緩沖甘油封片，觀察。

二、CIGSS的優點
（1）陽性結果比黑色更鮮明。
（2）可以使弱信號得到進一步放大。
（3）可部分消除IGSS背景染色。
（4）信號/背景比值高。
（5）是開展IHC雙重或多重標記的新途徑。

原文地址:/biotech/Immunity/colloidalgold/2009/p820464783