禽流感抗體試劑盒說明書

【資料簡介】

 

禽流感抗體（ AIV-Ab）酶聯(lián)免疫分析

 

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

 

 

96T

使用目的：

本試劑盒用于測定血清、血漿及相關(guān)液體樣本中禽流感抗體（ AIV-Ab）表達。實驗原理本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中禽流感抗體（ AIV-Ab）表達。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中禽流感抗體（ AIV-Ab）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP標記的抗原結(jié)合，形成抗原 -抗體-酶標抗原復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。 TMB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度（ OD值），與 CUTOFF值相比較，從而判定標本中禽流感抗體（ AIV-Ab）的存在與否。

試劑盒組成

1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶 2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 陽性對照 0.5ml×1瓶 3 酶標包被板 12孔 × 8條 9 陰性對照 0.5ml×1瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份 5 顯色劑 A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 6 顯色劑 B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于 -20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（ HRP）活性。操作步驟

1.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設(shè)陰性對照 2孔、陽性對照 2孔、空白對照 1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50µl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。

4.配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此重復 5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻， 37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定：以空白空調(diào)零， 450nm波長依序測量各孔的吸光度（ OD值）。測定應在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行。

 

操作程序總結(jié)：

計算和結(jié)果判定：試驗有效性：陽性對照孔平均值 ≥1.00;陰性對照平均值 ≤0.10臨界值（ CUT OFF）計算：臨界值 =陰性對照孔平均值 +0.15陰性判定：樣品 OD值<臨界值（ CUT OFF）者為禽流感抗體（ AIV-Ab）陰性陽性判定：樣品 OD值≥臨界值（ CUT OFF）者為禽流感抗體（ AIV-Ab）陽性

。注意事項

1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為 630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M的硫酸，使用時必須注意安全。保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期： 6個月

標本收集方法：
1. 血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
2. 血漿：
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清

。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
3. 尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參

照此實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。
5. 培養(yǎng)細胞
    檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試

劑，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離

心。
6. 組織標本
    切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度。加入一定量

的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分

裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

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