48T大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α

【資料簡介】

大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1αELISA 檢測試劑盒

本試劑僅供研究使用  標本：血清或血漿

試驗原理：
PGC-1α試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知PGC-1α濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將PGC-1α和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中PGC-1α的濃度呈比例關系。

試劑盒內容及其配制：
試劑盒成份 96孔配置 48孔配置
96/48人份酶標板 1塊板（96T） 半塊（48T）
塑料膜板蓋 1塊 半塊
標準品：800nmol/L 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml）
空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml）
標準品稀釋緩沖液 1瓶（8.0ml） 1瓶（4.0ml）
生物素標記的抗PGC-1α抗體 1瓶（8.0ml） 1瓶（4.0ml）
親和鏈酶素-HRP 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml）
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml）
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）

大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1αELISA 檢測試劑盒
自備材料：
1． 蒸餾水。
2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等。
4． 
樣品收集、處理及保存方法：

1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。  
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作注意事項：

? 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
? 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
? 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
? 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
? 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
? 底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
? 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
? 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1αELISA 檢測試劑盒
安全性：

1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

試劑的準備：

1． 標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：
800
 nmol/L （6號標準品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
400
nmol/L （5號標準品） 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
200
nmol/L （4號標準品） 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
100
nmol/L （3號標準品） 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50
nmol/L （2號標準品） 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 nmol/L （1號標準品） 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 nmol/L （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1αELISA 檢測試劑盒
試劑盒性能：

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。

  
操作步驟：

1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
2． 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
4． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
5． 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。
8． 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。

大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1αELISA 檢測試劑盒
結 果 判 斷 與 分 析：

1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的PGC-1α標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的PGC-1α含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度, 再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
3、檢測值范圍：0-800nmol/L
4、敏感度： 1.0 nmol/L

3,3’-Dimethoxybenzidine, dihydrochloride 3,3 -二甲氧基聯苯胺鹽酸鹽 [20325-40-0] 100g
Flunixin meglumine 氟尼辛葡甲胺 [42461-84-7] 100g
9-Fluorenone-4-carboxylic acid 9-芴酮-4-甲酸 [6223-83-2] 25g
Fluorescein, free acid 熒光素 [2321-07-5] 100g
DTAC 十二烷基 -*基氯化銨 [112-00-5] 250g
3,5-Dimethoxybenzoic acid 3,5-二甲氧基苯甲酸 [1132-21-4] 250g
2,7-Dimethoxynaphthalene 2,7-二甲氧基萘 [3469-26-9] 100g
N,N-Dimethylacetamide N’,N-二甲基乙酰胺 [127-19-5] 250ml
6-Dimethylallylaminopurine 6-（異戊烯基氨基）嘌呤 [2365-40-4] 1g
6-Dimethylallylamino purine riboside （2iP Riboside） 6-（γ,γ-二甲基烯丙基氨基）嘌呤核苷 [7724-76-7] 100mg
Dimethylamine hydrochloride 二甲胺鹽酸鹽 [506-59-2] 500g
4-（Dimethylamino）-benzaldehyde 4-（二甲氨基）苯甲醛 [100-10-7] 100g
5-（p-Dimethylaminobenzal） rhodanine 玫瑰紅銀試劑 [536-17-4] 25g
2-（Dimethylamino）ethyl methacrylate 甲基丙烯酸二甲氨乙酯 [2867-47-2] 100g
3-（Dimethylamino）phenol 3-羥基-N,N-二甲基苯胺 [99-07-0 ] 100g
4-Dimethylaminopyridine 對二甲氨基吡啶 [1122-58-3] 250g
2,4-Dimethylaniline 2,4-二甲基苯胺 [95-68-1] 250ml
2,6-Dimethylaniline 2,6-二甲基苯胺 [87-62-7] 250ml
DATC 50% Solution 十二烷基-*基-氯化銨50% / 500ml
DNase II, Pocine Pancreas 脫氧核糖核酸酶II [9025-64-3] 80KU