人輪狀病毒IgA（RV-IgA）ELISA試劑盒說明書

【資料簡介】

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人輪狀病毒IgA（RV-IgA）酶聯免疫分析

試劑盒使用說明書

    本試劑盒僅供研究使用。                                            48T

藥品名稱：
通用名：人輪狀病毒 IgA（RV-IgA ）酶聯免疫分析試劑盒
使用目的：
    本試劑盒定性測定人血液、或其它相關組織中輪狀病毒 IgA（RV-IgA ）。
實驗原理：
    本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫法（ELISA ）測定標本中人輪狀病毒IgA（RV-IgA ）。
用純化的輪狀病毒 IgA（RV-IgA ）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中輪狀病毒
IgA（RV-IgA ）抗原相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與 HRP 標記的輪狀病
毒 IgA（RV-IgA ）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物 TMB
顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀
在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），與 CUTOFF 值相比較，從而判定標本中人輪狀病毒
IgA（RV-IgA ）的存在與否。
試劑盒組成：

  1   20 倍濃縮洗滌液         20ml ×1 瓶    7   終止液                      3ml ×1 瓶

  2   酶標試劑              3ml ×1/瓶     8   陽性對照                     0.5ml ×1 瓶

  3   酶標包被板             12 孔×4 條     9   陰性對照                     0.5ml ×1 瓶

  4   樣品稀釋液             3ml ×1 瓶     10  說明書                      1 份

  5   顯色劑 A 液           3ml ×1 瓶     11  封板膜                      2 張

  6   顯色劑 B 液           3ml ×1 瓶     12  密封袋                      1 個

標本要求：
    1．標本處理：血清、血漿標本可直接檢測
    2 ．標本按要求制備后盡早進行實驗。如不能及時檢測，可將標本在-20℃保存一個月，
       但應避免反復凍融。
    3．不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP ）活性。
操作步驟：
1.  編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1
    孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2.  加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照（標準品）50μl。然后在待測
    樣品孔先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，
    盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3.  溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30 分鐘。
4.  配液：將 30 倍濃縮洗滌液加蒸餾水至 600ml 后備用
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
    重復 5 次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。
7.  溫育：操作同 3 。
8.  洗滌：操作同 5。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑 A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
    15分鐘
10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止
    液后 15 分鐘以內進行。

人輪狀病毒IgA（RV-IgA）ELISA試劑盒說明書

結果判定：
    試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00;  陰性對照平均值≤0.15
    臨界值（CUT OFF）計算：臨界值= 陰性對照孔平均值+0.15
    陰性判定：樣品OD 值<          臨界值（CUT OFF）者為輪狀病毒IgA（RV-IgA ）陰性
    陽性判定：樣品OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為輪狀病毒IgA（RV-IgA ）陽性
注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2 ．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
   用完，板條應裝入密封袋中保存。
3 ．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
4 ．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5 ．底物請避光保存。
6 ．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm
7 ．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M  的硫酸，使用時必須
   注意安全。

保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2 ．有效期：6 個月
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