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犬甲型肝炎病毒IgG抗體(HAV-IgG)ELISA檢測(cè)試劑盒

2013年03月15日 14:32:48人氣:279來(lái)源:上海裕臣生物科技有限公司

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關(guān) 鍵 詞上海裕平生物,酶聯(lián)免疫試劑盒,48T/96T,進(jìn)口
【資料簡(jiǎn)介】

犬甲型肝炎病毒IgG抗體(HAV-IgGELISA檢測(cè)試劑盒

使用說(shuō)明書(shū)

檢測(cè)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被犬甲型肝炎病毒IgG抗體HAV-IgG)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的犬甲型肝炎病毒IgG抗體HAV-IgG)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度OD 值),計(jì)算樣品濃度。


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樣品收集、處理及保存方法

1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

12孔×8

12孔×4

無(wú)

標(biāo)準(zhǔn)品(2400IU/L

0.6mL

0.6mL

按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

6mL

3mL

無(wú)

*

6mL

3mL

無(wú)

檢測(cè)抗體-HRP

10mL

5mL

無(wú)

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

底物A

6mL

3mL

無(wú)

底物B

6mL

3mL

無(wú)

終止液

6mL

3mL

無(wú)

封板膜

2

2

無(wú)

說(shuō)明書(shū)

1

1

無(wú)

自封袋

1個(gè)

1個(gè)

無(wú)

注:標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為:2400120060030015075IU/L.

 

4.  隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37水浴鍋或恒溫箱溫育60min

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

6.  每孔加入底物AB50μL37避光孵育15min

7.  每孔加入終止液50μL15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。 


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操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL

3.  待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,再加*40μL

上海裕臣生物科技有限公司作者

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