人轉(zhuǎn)移趨化生長因子ELISA試劑盒使用原理

【資料簡介】

人轉(zhuǎn)移趨化生長因子ELISA試劑盒試驗原理：
    TGF-beta1試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知TGF-beta1濃度的標準品、未知濃度的樣品 加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將TGF-beta1和*標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中TGF-beta1的濃度呈比例關(guān)系。樣品收集、處理及保存方法：
 
1、血清……操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原
和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅
 
細胞迅速小心地分離。
2、血漿……EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、細胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。
 5、保存……如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
 
人轉(zhuǎn)移趨化生長因子ELISA試劑盒操作注意事項：
●試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
●實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
●不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
●用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
●使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
●底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
●加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
●按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

操作步驟：
1.使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的*標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
4.甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5.每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6.甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7.每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。
8.取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結(jié)果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。
人轉(zhuǎn)移趨化生長因子ELISA試劑盒結(jié) 果 判 斷 與 分 析：
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的TGF-beta1標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的TGF-beta1含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
3、檢測值范圍： 0-1000pg/ml
4、敏感度：3.9pg/ml