細胞基質金屬蛋白酶原位明膠酶譜法熒光染色試劑盒說明書

【資料簡介】

主要用途

 細胞基質金屬蛋白酶（MMP）原位明膠酶譜法（in situ zymography）熒光染色試劑是一種旨在通過異硫氰酸熒光素標記的明膠作為底物，針對未固定處理的細胞樣品予以染色處理，基質金屬蛋白酶切離底物產生高度綠色熒光，來定位細胞中的基質金屬蛋白酶活性的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種動物細胞基質金屬蛋白酶-2和9的分析。產品即到即用，性能穩定，操作便捷，敏感度高，熒光清晰，重復性好。

技術背景

基質金屬蛋白酶（Matrix metalloproteinases；MMPs）是一類結構高度同源的分泌型或膜相關性鋅內肽酶的總稱，因含有金屬（鋅、鈣）離子而得名。迄今為止發現的MMPs至少有28種，幾乎能降解除多糖以外的全部細胞外基質（extracellular matrix）成分，同時參與胚胎發育、形態形成、胚泡植入（blastocyst）、血管形成、組織再吸收（tissue resorption）、疾病發生，例如關節炎、癌細胞浸入轉移等。根據降解的底物不同可將MMPs分為4大類：（1）膠原酶：MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和蛋白多糖；（2）明膠酶（Ⅳ型膠原酶）：MMP2、MMP9，又稱明膠酶A、B，主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和彈性纖維；（3）基質溶解素：MMP3、MMP7、MMP16、MMP11，主要作用于纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、彈力纖維、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ膠原及MMP1、MMP8、MMP9；（4）膜型金屬蛋白酶：MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP，主要作用于明膠、Ⅳ型膠原、MMP2。體內絕大多數細胞并不儲備MMPs，當需要MMPs的信號傳遞到細胞后才臨時合成，合成的MMPs以無活性的酶原（proenzyme）形式分泌到細胞外，隨后被多種蛋白酶和非蛋白酶水解以及熱處理激活，一種激活的MMPs可激活另一種MMPs，形成瀑布效應。原位明膠酶譜法熒光染色（in-situ fluorescence zymography）技術在于提高基質金屬蛋白酶檢測的敏感性，使用異硫氰酸熒光素（FITC）標記的明膠作為底物，經過基質金屬蛋白酶水解后產生熒光多肽，據此在熒光顯微鏡下檢測酶的活性和位置。