細胞轉染 實驗方法

【資料簡介】

                      細胞轉染 實驗方法 

細胞轉轉染技術以HeLa細胞為例

Day 1: HeLa細胞傳代入24孔板3個孔，1ml10％FBS的DMEM培養，密度以使其第2天能生長至70％左右面積為宜。

Day 2:

     1、轉染液的配制：

        A液：2×1μl lipofectamine Gibco 滴入 2×50μl無血清培基中，混勻后靜置。

                  B液：9.36μl MMP14-siRNA (4рmol/μl) 和9.36μlβ－gal-siRNA (4рmol/μl)分別與50μl無血清培基混勻后靜置。

            2、待A液靜置5分鐘時，取50μlA液分別滴入B液的兩組中。混勻，靜置15分鐘時，開始準備細胞。

       3、棄掉原細胞培養液，用2ml 1×PBS加入培養皿中，前后左右傾斜培養皿，洗細胞一次，盡量吸凈PBS。轉染混合液中分別補100μl無血清培基混勻，馬上滴入洗好的細胞上。靜置約2分鐘，放入37℃孵箱中。另設細胞陰性對照組，只用無血清培基處理。

       4、轉染后4小時，補800ml 15％FBS的DMEM，放入37℃孵箱中。

Day 5:轉染后70小時準備侵襲實驗。

     步驟見*部分，不同之處在于Matrigel為1mg/ml 30μl。

Day 8:侵襲實驗觀察12小時后，取出染色。

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