中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白（NGAL）試劑盒的組成

【資料簡介】

使用中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白（NGAL）試劑盒前*閱讀說明書。本酶聯免疫試劑盒是基于經典酶聯夾心技術原理，能測量人體NGAL，只能用于研究用途，不得用于醫學診斷。

【檢測范圍】：1000pg/ml→15.6pg/ml。
【敏感性】： ＜3pg/ml
【特異性】： 系統和其它因子無交叉反應。
【保存】： -20℃ [短期內（如兩周）可4℃]
【有效期】： 12個月（-20℃）。
【用途】： 用于體外定量分析液體標本（通用型）。

【中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白（NGAL）試劑盒每套試劑盒中內容】(96T)
材料 數量
人NGAL標準品 96T(2vial)
預包被人NGAL抗體的96孔板 96T（8×12）
生物素標記人NGAL抗體 96T (1:100)
ABC（親和素-過氧化物酶復合物） 96T (1:100)
樣品稀釋液 96T×2
人NGAL抗體稀釋液 96T×1
ABC稀釋液 96T×1
TMB顯色液A 96T×1
TMB顯色液B 96T×1
TMB終止液 96T×1
ELISA洗滌液 96T×1(1:25)

【中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白（NGAL）試劑盒需要而未提供的試劑和器材】
1． 37℃恒溫箱。
2． 標準規格酶標儀。
3． 自動洗板機。
4． 單通道或多通道可調節移液器以及其吸頭。
5． 蒸餾水，容量瓶等
6． 干凈的試管和Eppendof管。

【中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白（NGAL）試劑盒注意事項】
1． 從-20℃取出的試劑盒，在4℃解凍過夜。盒內每一瓶解凍的溶液在開啟瓶蓋之前都要輕輕搖勻，避免解凍時出現的分層，否則會出現濃度不均一的現象。
2． 開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。
3． 配制各種試劑時，切記混勻！
4． 用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底。
5． 建議所有人NGAL標準品、樣本都做雙份檢測。
6． 要嚴格避免操作過程中酶標板干燥。干燥會使酶標板上生物成份迅速失活！
7． 為免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和試管。

【中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白（NGAL）試劑盒洗板方法】
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的PBS或TBS洗滌緩沖液至少0.35ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

【中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白（NGAL）試劑盒樣品的準備和保存】
樣品如果不立即分析，應分裝后冷凍保存，且避免反復凍融。
血清——用干凈試管收集血液，室溫凝固2小時或4℃過夜，離心1000×g 10分鐘，收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
細胞培養、組織勻漿、體液——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

【中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白（NGAL）試劑盒工作原理】
NGAL（Neutrophil gelatinase associated lipocalin），中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白，是lipocalin家族的新成員，是脂質運載蛋白家族的一個新成員,它是腎功能損傷早期的生物標志物。NGAL是鐵粒子鰲和/轉運體，急性腎小管損傷早期表達。雖然結構尚不清，但被認為參與缺血再灌注損傷修復過程，可能與腎小管內皮再生有關。zui近研究表明NGAL是腎損傷的敏感指標。對腎移植病人的研究表明尿中NGAL和白介素18（IL-18）增加可預測移植腎功能恢復延遲，而且比血清肌酐增加的預測作用快近24小時。對心臟手術病人前瞻性研究發現術后1小時尿NGAL明顯增加。研究表明NGAL可能與炎癥反應、腫瘤發展、腎臟疾病有一定關系。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯免疫吸附測定試劑盒（ELISA）。預先包被的人NGAL抗體為多克隆人NGAL抗體。檢測相人NGAL抗體也為多克隆人NGAL抗體，經生物素（biotin）標記。樣品和生物素標記人NGAL抗體先后加入酶標板孔反應后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應；經過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關。