巨噬細胞炎癥蛋白2（MIP-2）操作

【資料簡介】

人巨噬細胞炎癥蛋白2（MIP-2）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：                                                          96T

15pg/ml-400pg/ml

 

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中巨噬細胞炎癥蛋白2（MIP-2）含量。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人巨噬細胞炎癥蛋白2（MIP-2）水平。用純化的人巨噬細胞炎癥蛋白2（MIP-2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入巨噬細胞炎癥蛋白2（MIP-2），再與HRP標記的巨噬細胞炎癥蛋白2（MIP-2）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的巨噬細胞炎癥蛋白2（MIP-2）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人巨噬細胞炎癥蛋白2（MIP-2）濃度
 

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1.         標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 

1.         待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

2.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

3.         配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

4.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

5.         加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

6.         溫育：操作同3。

7.         洗滌：操作同5。

8.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

9.         終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

10.     測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。