大鼠胱硫醚β-合成酶ELISA試劑盒

【資料簡介】

用純化的REG-4抗體包被微孔板，制成固相載體，往微孔中依次加入標本或標準品、*化的REG-4抗體、HRP標記的親和素，經過*洗滌后用底物（TMB）顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的REG-4呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（ 值），計算樣品濃度。

大鼠胱硫醚β-合成酶ELISA試劑盒請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 ng/ml，然后做系列倍比稀釋分別配制成200 ng/ml，100 ng/ml，50 ng/ml，25 ng/ml，12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.12 ng/ml，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 ng/ml。如配制100 ng/ml標準品：取0.5ml （不要少于0.5ml ）200 ng/ml的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

1、 酶標儀（建議儀器使用前提前預熱）

2、 微量加液器及吸頭，EP管

3、 蒸餾水或去離子水，濾紙

1、 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4 過夜后于1000 g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20或-80 保存，但應避免反復凍融。

2、 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于 1000 g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20 或-80 保存，但應避免反復凍融。

3、 其它生物標本：請1000 g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20 或-80 保    存，大鼠胱硫醚β-合成酶ELISA試劑盒但應避免反復凍融。

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫，試劑不能直接在37 溶解；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，混勻時盡量避免起泡。計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1、 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液 100 ，余孔分別加或待測樣品100 ，注意不要有氣泡，加樣 時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37溫育2小時。

2、 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加 100 （臨用前配制），酶標板加上覆膜，37 溫育1小時。

3、 棄去孔內液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400 /每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

4、 每孔加（臨用前配制）100 ，加上覆膜，37 溫育1小時。

5、 棄去孔內液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

6、 每孔加，酶標板加上覆膜（反應時間控制在15-30分鐘，當標準孔的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯時，即可終止）。

7、 每孔加50 ，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物    液的加入順序相同。

8、 立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度（ 值）。

加樣或加試劑時，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預溫育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間（包括標準品及所有樣品）控制在10分鐘內。*設置復孔進行實驗。

為防止樣品蒸發，實驗時將加上蓋或覆膜的酶標板置于濕盒內，以避免液體蒸發；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態；同時應嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。

4洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響zui后的酶標儀讀數。

在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、工作液工作液請依據所需的量配制使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請配制標準品及工作液，盡量不要微量配制（如吸取時，一次不要小于10 ），以避免由于不準確稀  釋而造成濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、工作液、工作液。

6、 加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化（比如，每隔10分鐘），如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。

7、底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。

1、 手工洗板方法：將*的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內，浸泡1-2分鐘，吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體，在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；根據需要，重復此過程數次。由于現有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析，

大鼠胱硫醚β-合成酶ELISA試劑盒產品可能存在一定的質量技術風險。

2、  zui終的實驗結果與試劑的有效性、實驗者的相關操作以及當時的實驗環境密切相關，請務必

準備充足的標本備份。

3、 只有全部使用、試劑才能保證檢測效果，因為所有試劑都是有關聯的，不能混用其他制造商的產品。只有嚴格遵守試劑的實驗說明才會得到的檢測結果。

4、 在儲存及溫育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發和微生物的   污染，因為蛋白水解酶的干擾將導致出現錯誤的結果。

5、 試劑盒保存：請收到試劑盒后盡快將標準品、檢測溶液A和檢測溶液B保存于-20 ，其余試劑短期保存請置于4 ，*保存則置于-20 。開封后的酶標板要密封加干燥劑后保存于-20 ，避免潮濕。

6、 濃洗滌液會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。

7、 剛開啟的酶聯板孔中可能會有少許水樣物質，此為正常現象，不會對實驗結果造成任何影響。

8、 有效期：6個月。