β-葡萄糖苷酶（β-Glucosidase,）試劑盒

【資料簡介】

β-葡萄糖苷酶（β-Glucosidase, β-GC）試劑盒說明書微量法 100管/48樣
測定意義：
β-GC（EC 3.2.1.21）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，催化β-糖苷鍵水解，具
有多方面生理作用：在纖維素的糖化作用中，β-GC負責進一步水解纖維素二糖和纖維素寡
糖生成葡萄糖；β-GC水解萜烯類香氣前驅(qū)體，使糖苷鍵合態(tài)變成游離態(tài)。從而產(chǎn)生香味；
β-GC能夠水解植物體內(nèi)野黑櫻苷，釋放 HCN，從而防止昆蟲取食。
β-葡萄糖苷酶（β-Glucosidase,）試劑盒測定原理：
β-GC分解對-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成對-硝基苯酚，后者在 400nm 有zui大吸收峰，
通過測定吸光值升高速率來計算β-GC活性。
自備用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、
研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入 12mL 蒸餾水，充分溶解備用；用不完的
試劑仍-20℃保存。
試劑二：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。
β-葡萄糖苷酶（β-Glucosidase,）試劑盒粗酶液提取：
1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量
（104
個） ：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議500 萬細菌或細胞加入1mL 提
取液） ，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔10s，重復 30 次） ；
15000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g） ：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g 組織，
加入1mL 提取液） ，進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟
1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 400nm，蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表
試劑名稱（μL） 測定管 對照管
試劑一 120
試劑二 150 150
樣本 30 30
充分混勻，放入 37℃準確水浴30min 后，立即放入沸水浴中煮沸5min（蓋緊，以
防止水分散失） ，流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變）
試劑一 120
充分混勻，8000g，4℃，離心 5min，取上清液（在 EP管或 96孔板中加入下列試劑）
上清液 70 70
試劑三 130 130
充分混勻，室溫靜置 2min 后， 400nm 處測定吸光值 A，計算ΔA=A 測定管-A 對照管。
每個測定管需設一個對照管。
β-GC活力計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.32x -0.0027；x 為標準品濃度（nmol/mL） ，y 為吸光值。
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白每小時產(chǎn)生1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
β-GC活力(U/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.32×V 反總]÷(V樣×Cpr)÷T =62.5×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每 g 組織每小時產(chǎn)生1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
β-GC活力(U /g 鮮重)＝[(ΔA+0.0027)÷0.32×V 反總]÷(W×V 樣÷V樣總)÷T
=62.5×(ΔA+0.0027) ÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
β-葡萄糖苷酶（β-Glucosidase,）試劑盒單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每小時產(chǎn)生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
β-GC活力(U/104
cell)=[(ΔA+0.0027) ÷0.32×V反總]÷(500×V 樣÷V樣總)÷T
=0.125×(ΔA +0.0027)
Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；V 反總：反應體系總體積，0.3mL；V 樣：加入反應體系中
樣本體積，0.03mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g； 500：細胞或細
菌總數(shù)，500萬；T：反應時間，0.5h。
b.用 96孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.16x -0.0027；x 為標準品濃度（nmol/mL） ，y 為吸光值。
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白每小時產(chǎn)生1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
β-GC活力(U/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.16×V 反總]÷(V樣×Cpr)÷T =125×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每 g 組織每小時產(chǎn)生1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
β-GC活力(U /g 鮮重)＝[(ΔA+0.0027)÷0.16×V 反總]÷(W×V 樣÷V樣總)÷T
=125×(ΔA+0.0027) ÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每小時產(chǎn)生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
β-GC活力(U/104
cell)=[(ΔA+0.0027) ÷0.16×V反總]÷(500×V 樣÷V樣總)÷T
=0.25×(ΔA +0.0027)
Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；V 反總：反應體系總體積，0.3mL；V 樣：加入反應體系中
樣本體積，0.03mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g； 500：細胞或細
菌總數(shù)，500萬；T：反應時間，0.5h。